1.目的 研究云南大理旋毛虫（Trichinella spiralis）不同时龄新生幼虫（NBL）在宿主体外培养和收集的方法；初步分析云南大理旋毛虫不同时龄NBL虫体可溶性抗原的蛋白组分及免疫反应性，观察在新生幼虫发育的不同时段其虫体抗原中蛋白组分的差异。为进一步分析、筛选和分离免疫原性和免疫反应性强的旋毛虫NBL抗原成分，用DNA重组技术研制重组抗原提供一定的实验基础，为旋毛虫病的免疫预防和免疫诊断提供理论依据。 2.方法 分离、体外培养实验室保种的大理猪源旋毛虫成虫，收集NBL；体外培养NBL，分别收集24h、48h NBL；制备旋毛虫肌肉幼虫、成虫及不同时龄NBL虫体可溶性抗原；制备免疫血清；以大理猪源旋毛虫肌肉幼虫和成虫可溶性抗原为对照，采用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE），对不同时龄NBL虫体可溶性抗原蛋白组分进行分析；采用免疫印迹试验（Western—blot），对不同时龄NBL虫体可溶性抗原的免疫反应性进行分析。 3.结果 （1）不同时龄NBL的体外培养和收集结果 本研究选择10只成年SD雄性大鼠，每只大鼠感染10000条旋毛虫肌肉幼虫，收集纯净成虫40000条，同时发现收集的成虫中有许多雄虫，表明雄虫并未在交配后很快死亡。将成虫培养24h后，共产生NBL20万余条，然后将所收集的NBL分别培养24h、48h后，取培养瓶在倒置显微镜下观察，可见虫体随培养时间的延长而逐渐增大，活力良好。 （2）SDS—PAGE分析结果 SDS—PAGE分析结果显示：旋毛虫成虫可溶性抗原显示40条蛋白染色条带，分子量范围在120kDa—10kDa之间，其中主带14条，分子量分别为100、95、81、68、58、50、45、43、37、35、30、27、24、20kDa；旋毛虫肌肉幼虫可溶性抗原显示30条蛋白染色条带，分子量范围在100kDa—12kDa之间，其中主带8条，分子量分别为66、63、50、43、34、30、16、12kDa；24h旋毛虫NBL可溶性抗原显示36条蛋白染色条带，分子量范围在160kDa—10kDa之间，其中主带12条，分子量分别为120、100、89、78、73、64、58、54、46、40、34、25kDa；48h旋毛虫NBL可溶性抗原亦显示40条蛋白染色条带，分子量范围在172kDa—10kDa之间，其中主带17条，分子量分别为120、102、89、87、79、74、72、64、58、54、46、40、34、32、25、18、10kDa。 （3）Western—blot检测结果 Western—blot检测结果显示：以大鼠抗旋毛虫血清检测时，旋毛虫成虫可溶性抗原可出现13条反应条带，其中以分子量为85、40、37、33、29kDa的条带着色较深；旋毛虫肌肉幼虫可溶性抗原可出现25条反应条带，分子量范围在80kDa—10kDa之间，有10条明显的主带，分子量分别为80、75、65、63、55、49、45、38、20、15kDa；24h旋毛虫NBL可溶性抗原可出现3条反应条带，分子量分别为64、58、34kDa；48h旋毛虫NBL可溶性抗原可出现5条反应条带，分子量分别为64、58、38、34、18kDa；以大鼠抗旋毛虫NBL血清检测时，旋毛虫成虫可溶性抗原可出现6条反应条带，其中以分子量为40、33、29kDa的条带着色较深；旋毛虫肌肉幼虫可溶性抗原可出现4条明显的主带，分子量分别为63、45、38、20、15kDa；24h旋毛虫NBL可溶性抗原可出现7条反应条带，分子量分别为89、78、64、58、40、34、25kDa；48h旋毛虫NBL可溶性抗原可出现14条反应条带，分子量分别为89、87、79、74、72、64、58、40、38、34、32、25、18、10kDa。而阴性血清在相应位置均无特异性反应条带出现。 4.结论 （1）本研究在体外培养和收集NBL的方法效果好，可制备不同时龄NBL，为NBL的深入研究奠定了基础。 （2）本研究经SDS—PAGE观察到云南大理旋毛虫24h、48h NBL虫体可溶性抗原存在分子量为120、89、64、58、54、46、40、34、25kDa的共同蛋白组分，其中48hNBL虫体可溶性抗原中存在不同于24hNBL虫体可溶性抗原的蛋白组分，其分子量为87、74、32、18、10kDa，NBL虫体可溶性抗原的蛋白组分随时龄的增大而增多。 （3）本研究经Western—blot观察到大鼠抗旋毛虫血清和大鼠抗NBL血清对云南大理旋毛虫24h、48h NBL虫体可溶性抗原中分子量为89、64、58、40、34、25kDa的组分特异性识别较强，这些组分具有较强的免疫反应性。 （4）本研究结果为进一步分析、筛选和分离免疫原性和免疫反应性强的旋毛虫NBL抗原成分，用DNA重组技术研制重组抗原提供一定的实验基础，为旋毛虫病的免疫预防和免疫诊断提供理论依据。