免疫球蛋白G在人卵母细胞及受精卵中的表达

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目的:  从人体免疫学角度来说,存活于母体中的胚胎是一种半同种异体组织,但在妊娠过程中它却可以逃避母体的免疫排斥。这一现象提示免疫耐受机制在妊娠过程中提供了极为重要的帮助,就如同肿瘤性疾病一样,包含外来抗原的团块可逃避机体免疫系统的攻击而存活。而免疫球蛋白G(IgG)是唯一的可通过胎盘进行转移来保护胎儿的抗体类型。在经典学说中,IgG只能由成熟B淋巴细胞和浆细胞合成和分泌,但近期也发现在非淋巴细胞中也存在IgG的表达,包括肿瘤细胞、胎盘滋养层细胞和精子等。本课题通过设计相关实验验证人卵巢组织中卵母细胞和受精卵细胞内IgG的表达分布情况,从而进一步探讨IgG在受精和着床过程中的免疫作用,明确IgG在提高体内外妊娠成功率方面的重要作用。  方法:  ⑴从汕头大学医学院病理科及汕头大学医学院附属肿瘤医院病理科处收集18例正常卵巢组织,另外,从成都婵城区妇幼保健院收集10例人工体外受精受精卵。该课题实验对象均已通过汕头大学医学伦理委员会审核,并取得患者及其家属的知情同意。⑵蛋白质免疫印迹技术(Western Blot,WB)检测人卵巢新鲜组织中IgG的表达。⑶免疫组织化学(Immunohistochemistry, IHC)二步法检测人卵巢组织石蜡切片中 IgG的表达情况。⑷免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF)检测受精卵细胞中IgG表达情况。⑸原位杂交技术(in situ hybridization, ISH)检测人卵巢石蜡组织切片和受精卵细胞中IgG mRNA(IGHG1)的表达。⑹巢式PCR技术(nested-PCR技术)检测新鲜人卵巢组织中IgG mRNA(IGHG1)和合成IgG相关基因mRNA(RAG1、RAG2和AID)的表达。  结果:  ①免疫印迹结果表明人卵巢组织中存在IgG的表达,并经免疫组织化学实验进一步表明, IgG及其亚型的阳性信号位于卵巢卵母细胞胞浆内。且免疫荧光实验中显示在受精卵细胞胞浆内也存在IgG阳性信号,在极体中阳性信号很明显。②原位杂交结果显示在卵母细胞胞浆和受精卵细胞胞浆中存在IGHG1mRNA的表达。②巢式PCR结果显示在新鲜人卵巢组织中存在IGHG1、RAG1和RAG2基因mRNA的表达,而AID基因检测不出来。  结论:  IgG蛋白及其mRNA均存在于卵母细胞和受精卵细胞上。这说明,IgG不但可在卵母细胞及受精卵细胞上表达,且卵母细胞和受精卵细胞可分泌部分IgG。这部分IgG应当在卵母细胞受精及受精卵着床过程中承担重要作用,可能作为母体一个保护受精和着床的措施,从而使受精失败和流产的概率下降,提高体内外妊娠成功率。
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