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类叶牡丹(Caulophyllum robustum Maxim.)为小檗科红毛七属植物红毛七的根状茎及根的干燥根及根茎,该药材广泛用于治疗风湿性关节炎、跌打损伤、胃痛、月经不调等症,尤其在类风湿方面的治疗具有显著性疗效。鉴于类叶牡丹化学成分的复杂性,找寻发挥药效的具体化学成分是类叶牡丹药材研究的热点与难点。本文建立了 11批不同产地、不同采收年限类叶牡丹总提物的高效液相(HPLC)指纹图谱,以胶原诱导型类风湿性关节炎(CIA)为药效学模型,选用特征性药效指标进行研究,运用相关分析及多元线性回归分析法初步考察了类叶牡丹药材有效部位指纹图谱与抗类风湿性关节炎之间的谱效相关性。1为了使指纹图谱更好的表征类叶牡丹药材的特征信息,本文在工艺筛选的基础上,以有效部位提取率结合炎症抑制率药效学指标,采用(L934)正交试验法对类叶牡丹药材的提取工艺条件进行了优化,初步确定类叶牡丹总提物的制备工艺为:80%乙醇回流提取3次,每次加6倍量乙醇,提取2.5小时。2为建立11批类叶牡丹药材HPLC指纹图谱分析,本文通过对色谱条件的优化以及系统方法学的考察,依据指纹图谱研究的要求,运用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”软件处理,生成共有模式对照图谱,确定了 17个共有峰,其中9个峰被指认,其中峰1:N-甲基金雀花碱,保留时间3.671;峰2:木兰碱,保留时间17.720;峰8:CaulosideH,保留时间 24.181;峰 9:LeonticinD,保留时间 24.804;峰 10:CaulosideG,保留时间 25.328;峰 11:CaulosideD,保留时间 27.220;峰 13:CaulosideC,保留时间39.347;峰15:齐墩果酸,保留时间43.940;峰16:β-谷甾醇,保留时间45.422;其余未被指认的特征峰通过紫外光谱对照,初步推测:峰4、峰6、峰7为生物碱类成分,峰3、峰5、峰12、峰14、峰17为皂苷类成分。同时对11批类叶牡丹药材进行相似度分析以及聚类分析,结果表明,11批药材与对照谱图间的相似度均符合要求,分别为0.977,0.935,0.985,0.945,0.984,0.965,0.979,0.987,0.985,0.976,0.971。然而不同产地、不同采收年限类叶牡丹药材间的相似度数值却有所差异,说明产地、采收年限不同对药材有影响。聚类分析结果显示,可将11批药材分为两大类,一类为S1和S2,另一类为S3-S11,其中S7和S9;S8和S10;S3、S4和S11;S5和S6又可以分为分为4小类,这与相似度评价分析中结果相一致。3将1mg/ml的胶原-完全弗氏佐剂混合乳剂皮内注射于小鼠尾根部,建立CIA模型,分别以炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17的含量、炎性指标PGE2含量以及T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+的比值作为量化指标,小鼠体重变化、足爪肿胀度、关节炎评分、内脏指数作为辅助衡量指标对不同产地、采收年限的类叶牡丹药材抗炎、免疫药效学进行评价,发现不同采收产地、不同采收年限类叶牡丹药材提取物的抗炎、免疫活性存在差异,2014年黑龙江产类叶牡丹抗炎、免疫效果最好,其次是2013年黑龙江产、2014年四川产、2014年河北产、2012年黑龙江产、2013年四川产。即在抗炎、免疫药效比较为:在采收年限相同时,黑龙江产类叶牡丹>四川产类叶牡丹>河北产类叶牡丹;产地相同时,2014年>2013年>2012年。4分别采用相关分析法及多元线性回归分析法对类叶牡丹药材指纹图谱中共有峰的峰面积数据与抗类风湿性关节炎作用结果进行了谱效相关性研究,两种分析方法综合表明:类叶牡丹药材HPLC指纹图谱中的17个指纹峰中,(1)以炎性因子TNF-α含量为指标时,2、6、11、17号峰综合作用发挥抗炎功效;(2)以炎性因子IL-1β含量为指标时,1、3、6、7、12、13、14号峰综合作用发挥抗炎功效;(3)以炎性因子IL-6含量为指标时,1、2、13、17号峰综合作用发挥抗炎功效;(4)以炎性因子IL-17含量为指标时,1、2、7、10、15号峰综合作用发挥抗炎功效;(5)以炎性指标PGE2含量为指标时,1、2、10号峰综合作用发挥抗炎功效;(6)以T淋巴细胞中的CD4+/CD8+的比值为免疫衡量指标时,1、2、17号峰综合作用发挥免疫功效。综合以上结果可知,类叶牡丹药材中化学成分与药效之间不但呈线性关系,且多成分共同发挥抗炎免疫药效,主要特征峰为:1、2、3、6、7、10、12、13、14、15、17 号峰。其中峰 1:N-甲基金雀花碱;峰2:木兰碱;峰10:CaulosideG;峰12CaulosideD;峰13:CaulosideC;峰15:齐墩果酸。综上所述,本研究以类叶牡丹药材为研究对象,将其抗类风湿性关节炎的效果作为药效学评价指标,采用HPLC指纹图谱表征了其整体化学特征,以细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17的含量,炎性指标PGE2的含量,T淋巴细胞亚群CD4+/CD8的比值分别作为衡量类叶牡丹抗类风湿性关节炎的药效指标,综合运用相关分析及多元线性回归分析数据处理技术建立了不同产地、不同采收年限类叶牡丹药材“谱”与“效”的相关性,对药效成分进行了推测,结果表明,类叶牡丹中生物碱类成分(N-甲基金雀花碱,木兰碱,峰6,峰7)、皂苷类成分(CaulosideG,CaulosideC,峰3,峰12,峰14,峰17)与皂苷元(齐墩果酸)多种成分共同发挥了抗炎、免疫功效。本研究为类叶牡丹中有效物质的辨识奠定了基础,同时为其质量控制提供了依据。