脑红蛋白基因在高眼压诱导的大鼠视网膜急性缺血损伤中的表达

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目的脑红蛋白(neuroglobin,NGB)是新近发现的主要在脑和视网膜组织中表达的第三类携氧球蛋白,主要以单体形式存在于神经细胞中。目前认为NGB可能具有以下作用:贮氧功能,氧传感器功能,协助氧扩散和供氧功能;清除活性氧和氮类物质的功能,即活性氧簇清道夫和一氧化氮转化酶功能;作为末端氧化酶在缺氧时使NAD~+再生和促进ATP的产生等功能。NGB的发现,为神经系统缺血缺氧损伤的研究指出了新方向。我们通过对高眼压诱导的大鼠视网膜急性缺血缺氧模型中NGB mRNA的表达研究,探讨NGB与视网膜缺血缺氧损伤之间的相关性。通过RT-PCR技术对大鼠视网膜缺血缺氧损伤模型中不同时点NGB mRNA表达情况进行检测分析,探讨脑红蛋白在视网膜缺血缺氧性损伤中的作用,旨在为视网膜缺血缺氧相关疾病的发病机理和临床治疗提供依据。方法随机将50-60日龄Wistar大鼠70只分为7组,每组10只,单眼造模(左眼),升高眼压至110mmHg,制成高眼压诱导的视网膜急性缺血损伤模型,分别在眼压升高1min,5min,10min,15min,20min,30min,60min迅速取视网膜,对侧眼作为自身正常对照直接取视网膜。提取视网膜组织总RNA,设计脑红蛋白基因引物,用半定量RT-PCR进行检测,取PCR产物进行EB琼脂糖凝胶电泳,采用紫外-凝胶成像分析系统记录电泳结果,采用图像分析软件定量分析电泳结果。以SPSS统计软件的单因素方差分析对电泳结果进行数据统计处理,结果以均数±标准差表示,以P<0.05作为差异有统计学意义。结果脑红蛋白、β-actin扩增后的产物片段与设计相符,大鼠视网膜急性缺血损伤模型中不同时点各组间均值和对照组均值的差异有统计学意义(F=6.827,P<0.01)。检测中可见:缺血1 min组,脑红蛋白mRNA表达较对照组迅速增加,缺血5 min达高峰(与对照组比较差异有统计学意义,P<0.01),10~15 min开始降低,但仍然保持在高水平(P<0.05),20~30 min已迅速降低,但仍高于对照组(P>0.05),60 min相对于对照组水平略有降低(与对照组比较差异无统计学意义)。结论大鼠视网膜急性缺氧缺血性损伤后脑红蛋白mRNA表达增强,提示脑红蛋白可能在视网膜缺氧的适应性调节过程中起了重要作用,并且NGB的表达在视网膜急性缺血损伤的过程呈现时相性变化,且和视网膜缺血的组织学耐受时间密切相关,提示,脑红蛋白在急性视网膜缺血损伤过程中可能起到保护作用。
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