黄芪甲苷对人脐带间充质干细胞成骨分化能力研究

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黄芪甲苷(AS-IV)是黄芪主要的化学活性成分之一,具有广泛药理活性,黄芪甲苷对局部病灶性脑缺血脑损伤、心血管疾病、肺部疾病、肝硬化和糖尿病肾病具有保护作用,可改善器官纤维化、炎症反应、氧化应激和细胞凋亡。利用人脐带间充质干细胞(h UCMSCs)的分化进行组织再生和修复已成为再生医学研究的热点。h UCMSCs方便获得且易于收集,易于培养,体外增殖能力强。且有研究表明脐带间充质干细胞与其他类型干细胞相比成骨分化能力更强。h UCMSCs在骨组织工程的临床试验和应用有巨大的发展潜力。探究诱导h UCMSCs成骨分化的诱导剂为其广泛应用奠定基础。首先配制低剂量组AS-IV 10mg/ml(AS-IV-L组),中剂量组AS-IV50mg/ml(AS-IV-M组)以及高剂量组AS-IV 100mg/ml(AS-IV-H组)。利用CCK-8法检测不同浓度黄芪甲苷对h UCMSCs体外增殖能力,随着AS-IV浓度升高,h UCMSCs活性越高;诱导h UCMSCs成骨分化,诱导21-28天,进行茜素红染色分析;最后利用Image J软件计算灰度值。在分子实验中,将h UCMSCs分成Control组、AS-IV-L组、AS-IV-M组、AS-IV-H组处理h UCMSCs。分别在处理48h和72h后,进行高通量测序,对原始数据进行分析。以及利用蛋白免疫印迹法实和RT-PCR法验证不同浓度的AS-IV对RUNX2、OPN、PAPP-A2的促进作用。采用RT-PCR验证IGF-1/IGF-1R信号通路对h UCMSCs的影响。本文论主要利用高通量测序方法探究黄芪甲苷对脐带间充质干细胞成骨分化的影响探究其机制。中国传统中药已经有几千年的历史,随着更多中药小分子单体的出现利用科学现代化手段的发展在分子层面阐明分子机制。为中医药现代化走向世界提供了理论基础和实验经验。
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