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动脉粥样硬化是一种动脉血管壁慢性炎症性疾病,其确切机制还未完全阐明,很多因素可促进其发生发展。而趋化因子是炎症的关键调节因子。基质细胞衍生因子SDF-1α(stromal cell derived- factor 1 alpha)是一类具有趋化活性的细胞因子,研究证实它在造血干细胞迁移及归巢、恶性肿瘤尤其血液肿瘤的浸润转移以其HIV感染方面发挥着重要作用。近几年来SDF-1α在动脉硬化性疾病中的作用也开始引起重视。本研究应用RT-PCR法从大鼠血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,Vsmcs;)中克隆出SDF-1α基因,并对其序列进行初步的生物信息学分析;然后构建EGFP-C1- SDF-1α重组质粒进行亚细胞定位分析;最后构建重组质粒pcDNA3.1-SDF-1α,研究其对单核细胞的趋化作用。目的:克隆大鼠SDF-1α基因,并对大鼠SDF-1α基因序列进行分析;分析SDF-1α蛋白亚细胞定位;探讨重组SDF-1α蛋白对单核细胞的趋化作用。方法:从大鼠Vsmcs中提取mRNA,用RT-PCR从中扩增出SDF-1α基因,将扩增片段克隆于pMD-T18载体中,转化DH5α菌;进行蓝白筛选后,运用PCR和酶切鉴定并DNA测序;利用生物信息学方法对SDF-1α基因的序列进行分析。构建EGFP-C1- SDF-1α表达载体,酶切鉴定,脂质体转染法将重组质粒瞬时转染Ecv304内皮细胞株,48h后用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达;构建重组质粒pcDNA3.1-SDF-1α,脂质体转染法转染Ecv304内皮细胞株,经G418筛选阳性克隆,RT-PCR验证,建立SDF-1α转基因稳定表达细胞系,再用小室迁移实验来研究SDF-1α对THP-1单核细胞的趋化作用。结果: PCR扩增得到378bp的基因片段,经酶切初步证实为SDF-1α基因;阳性克隆经筛选鉴定连接有目的基因;目的基因测序结果与GeneBank上序列比较,结果完全一致,表明靶基因成功插入pMD–T;用脂质体转染法将重组质粒EGFP-C1- SDF-1α瞬时转染内皮细胞,发现绿色荧光蛋白主要在细胞质中表达;用脂质体转染法将重组质粒pcDNA3.1-SDF-1α转染法转染内皮细胞,经G418筛选阳性克隆,RT-PCR验证,表明建立了SDF-1α转基因稳定表达细胞系,小室迁移试验发现SDF-1α对THP-1单核细胞的具有明显趋化作用。结论:成功克隆了SDF-1α基因,SDF-1α蛋白主要在细胞质中表达,重组的SDF-1α对单核细胞具有趋化作用。