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艾滋病即获得性免疫缺陷综合征（AIDS）,是由人类免疫缺陷病毒（HIV）感染人体后造成人的免疫系统缺陷。HIV是一种慢病毒（Lentivirus）,属逆转录病毒科的一种。目前在人群中传播的HIV可分为两型,即HIV-1和HIV-2。全球绝大多数的AIDS病例都是由HIV-1引起的。我国流行的HIV-1是以B’,CRF07/08 BC和CRF01 AE 3种亚型为主。由于HIV病毒具有高度的遗传复制变异性,所以临床上很难制备特异性通用型中和抗体,使艾滋病疫苗开发极具挑战性。本研究以在我国HIV-1主要流行的3种主要HIV-1亚型的gp120蛋白序列优化筛选通用型抗原和镶嵌抗原构建的gp120DNA疫苗进行制备和鉴定,用EP电转化法在实验小鼠和兔体内进行gp120 DNA疫苗不同免疫条件下的免疫效果评价。1.将HIV-1通用型ConS和ConTAE gp120序列插入pVAX1载体和含有鼠可溶性PD1的pVAX1-msPD1改良载体,构建的pVAX1-ConS,pVAX1-ConTAE,pVAX1-msPD1-ConS,pVAX1-msPD1-ConTAE 4种重组质粒大量制备后,通过Western blot检测gp120蛋白的表达,结果表明,4种重组质粒的蛋白具有很高的表达水平,能够被自然感染HIV-1患者的抗体识别,并且能够模拟天然病毒蛋白。2.用4种质粒转染293T细胞制备包被抗原,进行HIV-1特异性抗体检测的ELISA方法的建立和反应条件的优化。用HIV-1囊膜蛋白Env质粒和pNL荧光素酶标记的HIV-1骨架质粒,加入PEI,在opti-MEM中包装生成只具有一个复制周期的假病毒,将假病毒侵染ghost X4/R5细胞,通过多标记酶标仪检测,计算细胞相对荧光单位（RLU）用于免疫中和效果的评价。3.为了评价不同DNA疫苗的免疫表达效果,分别将4种ConS,ConTAE,msPD1-ConS,msPD1-ConTAE gp120 DNA疫苗,按照60 V、10 ms电击条件通过电转化法连续三次免疫BALB/c雌性小鼠。结果4种疫苗都能产生高滴度的抗体免疫应答,能够中和HIV-1 B亚型1级假病毒CNE40。4.用12月龄雌性新西兰大白兔,通过电转化法接种ConS gp120 DNA疫苗和ConTAE gp120 DNA疫苗。按照90 V,10 ms和60 V,10 ms两种电压条件,以及注射部位涂擦Imiquimod免疫佐剂等方式连续免疫三次。结果表明,90 V,10 ms高电压条件下,并不能显著提高DNA疫苗的免疫效果,用60 V,10 ms的低电压条件下注射免疫,能够使DNA疫苗产生高水平持久性的免疫应答。