利用RNAi建立Survivin沉默的细胞株及对Survivin功能的研究

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SurVivin基因(SVV)是1997年由耶鲁大学的DC.Altirei克隆的一个抗凋亡基因,属于IAP家族。Survivin基因的组织分布特征具有明显的细胞选择性,这一点与IAP家族的其他成员不同。研究发现Survivin基因表达于胚胎和发育的胎儿组织,而在正常的终末分化的成人组织中没有表达。但是在大多数的肿瘤组织中有Survivin基因的异常高表达,并且其表达与肿瘤的发生、发展以及预后有关。这些都提示我们Survivin基因在肿瘤的发生发展中具有重要的作用,是一个有潜在价值的肿瘤标志,与肿瘤的预后密切相关,可作为肿瘤基因治疗的新靶点。 RNA干扰技术(RNAl)是近年来新兴的基因功能分析、抗肿瘤和抗病毒的有利工具,正在功能基因组学领域掀起一场真正的革命,被Science评为2001年最重要的成果之一,在很多方面有广泛的应用前景。而siRNA的制备作为RNAl技术的一个关键环节,虽然已经有了各种制备方法,但是都有其相应的缺陷。探讨一种快速高效保质保量的siRNA制备方法对RNAi技术的开展具有重要的实际意义。 在本课题中,研究凋亡抑制基因Survivin野生型(简写为Survivin)及其异构体Survivin-AEx3(简写为Sur-△)在肝细胞癌中的mRNA表达情况,确定两者在肿瘤组织中的高表达;同时分别研究两者与肝细胞癌(HCC)临床各项指标之间的关系,从而探讨两者在评价HCC侵袭性和癌症进展中的价值。探讨两步PCR扩增shRNA表达框架,建立Survivin沉默的HepG<,2>细胞株,从而对Survivin的功能进行初步的研究,为肿瘤的基因治疗提供了基础。
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