环氧合酶-2及其选择性抑制剂对视网膜母细胞瘤生长增殖的影响

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目的:观察人视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞中环氧合酶—2(cyclooxygenase-2,COX-2)的表达情况,以及选择性COX-2抑制剂尼美舒利(nimesulide,NIM)对该细胞株生长增殖的影响。为选择性COX-2抑制剂应用于视网膜母细胞瘤的防治提供理论依据。方法:体外培养人视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞;采用免疫细胞化学SP法检测HXO-RB44细胞中COX-2的表达情况;将不同浓度的NIM(0、200、300和400μmol/L)作用于HXO-RB44细胞分别达24h、48h和72h后,于倒置相差显微镜下观察各时间段各组细胞形态学变化,并用台盼蓝拒染法进行细胞计数、绘制生长曲线和噻唑蓝(MTT)比色法观察NIM对细胞增殖的影响。结果:免疫细胞化学结果显示COX-2在人视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞中的表达率高达98.3%,阳性物质弥漫分布于整个胞浆或沿核膜周边呈线状分布。阴性对照组中阳性细胞表达率为0%。细胞培养24h后,倒置相差显微镜下观察各组细胞形态均无明显变化。200μmol/L浓度组于药物作用72h后细胞形态仍无显著变化,而300μmol/L浓度组72h后及400μmol/L浓度组48h小时后,可观察到部分细胞形态发生改变:细胞散在分布,形态变得不规则且折光性减弱,胞质中可见颗粒样物质。随着时间的延长和NIM浓度的增加细胞生长曲线逐渐变得平坦,48h至72h内400μmol/L组细胞甚至呈现负增长,曲线呈下降趋势。台盼蓝拒染实验显示低浓度、作用时间短时,活细胞率均较高,但随时间延长和药物浓度增加,活细胞率下降。MTT法显示NIM能降低HXO-RB44细胞的光吸收值(A值),细胞生长抑制率随作用时间和药物浓度的增加而增加。结论:1.COX-2在人视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞中呈高度表达;2.NIM能显著抑制HXO-RB44细胞的生长和增殖,抑制作用呈剂量和时间依赖性。
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