脂联素及其受体Poly-miRTS与冠心病相关性研究

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目的:在中国延边地区人群中寻找一个冠心病(CAD)易感性标记物。方法:本研究应用计算机生物信息学预测软件和NCBI-SNP数据库,从脂联素及其受体基因中筛选出和miRNA结合能差异(|△△G|)大于5.27 kcal/mol的6个野生型和变异型等位基因。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态法(PCR-RFLP)方法对6个野生型和变异型等位基因进行基因分型,比较基因型的分布频率,观察与冠心病易感性的相关性。应用PCR扩增3UTR基因组DNA,利用限制性内切酶切断PCR产物及pGL3系列的质粒,利用T4DNA连接酶连接两种DNA,制备pGL3-3’UTR系列的质粒,在E.coli中大量培养后与miRNA表达质粒一起转染给人平滑肌细胞株培养,进行荧光素酶检测,用含海肾萤光素酶(Renilla luciferase)的pRL-SV40质粒作为内部对照物,利用双荧光素酶基因检测系统测定启动子活性.,利用Trizol法提取不同基因型RNA后反转录为cDNA,利用qRT-PCR方法比较不同基因型的mRNA表达量。采用Western-blot法检测结果显示不同基因型的ADIPOR1蛋白表达量。结果:1.ADIPORl-rs7539542C等位基因冠心病发病率显著高于其他等位基因。2.通过用荧光素酶检测测定启动子活性,结果显示只有ADIPORl-rs7539542C有显著性统计学意义,p为0.03。3.qRT-PCR方法显示,rs7539542G时mRNA表达量显著低于rs7539542C,具有统计学意义,p为0.02。4. Western-blot法检测结果显示,rs7539542G时mRNA表达量显著低于rs7539542C,具有统计学意义,p为0.01。结论:本研究结果显示延边地区人群冠心病易感基因,ADIPORl-rs7539542C可作为延边地区预测冠心病易感性标志物。
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