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[目的]用无血清悬浮培养法从人绒毛膜癌JEG-3细胞系中分离培养绒毛膜癌干细胞样细胞并对其特性进行鉴定。[方法](1)将人绒毛膜癌细胞系JEG-3制成单细胞悬液,悬浮于特殊配制的无血清培养基(Serum-free medium, SFM)中获得JEG-3悬浮细胞球；(2)流式细胞仪检测JEG-3亲本细胞及JEG-3悬浮细胞球表面标志物CD44、CD133及ABCG2的表达；(3) Transwell小室迁移实验检测JEG-3亲本细胞及JEG-3悬浮细胞球的体外迁移能力；(4)台盼蓝染色增殖实验比较JEG-3亲本细胞及JEG-3悬浮细胞球的增殖能力,并绘制生长曲线；(5)将1000个细胞悬液置入SFM中培养,观察并计算其肿瘤球形成率；(6)有限稀释法观察悬浮细胞球单个细胞成球能力；(7)将JEG悬浮细胞球细胞置于含有血清的培养基中使其诱导分化,并观察其形态学的变化；[结果](1)人绒毛膜癌JEG-3可在SFM中存活、增殖,形成悬浮生长的细胞球,并可连续传代；(2)流式细胞仪检测干细胞表面标记物,JEG-3悬浮细胞球表面标志物CD44、CD133及ABCG2的表达均明显高于JEG-3亲本细胞(P<0.05)；(3) Transwell小室检测JEG-3亲本细胞及JEG-3悬浮细胞球的迁移能力,JEG-3悬浮细胞球较JEG-3亲本细胞具有更强的体外迁移能力(F值=8.140,P值0.008,P值<0.05)；(4)台盼蓝染色的增殖实验,JEG-3悬浮细胞球与JEG-3亲本细胞相比,JEG-3悬浮细胞球具有更强的增殖能力(F值=2775.601,P值<0.001)；(5)JEG-3亲本细胞、第一代JEG-3悬浮细胞球和第三代JEG-3悬浮细胞球的肿瘤球形成率分别为(7.57±0.80)%、(7.23±0.33)%(7.52±0.62)%,三者比较(P>0.05),即JEG-3亲本细胞与不同代的JEG-3悬浮细胞球的成球率无明显差异；(6)有限稀释法在96孔板中得到单个悬浮细胞球细胞,在显微镜下观察到了单个细胞增殖成悬浮细胞球过程；(7)将无血清培养基中的JEG-3悬浮细胞球细胞接种于含血清培养基中可重新贴壁分化,分化后细胞与JEG-3亲本细胞形态无明显差异。[结论](1)绒癌JEG-3细胞系在无血清培养基中可获得绒毛膜癌干细胞样细胞；(2)获得的JEG-3干细胞样细胞高表达肿瘤干细胞表面标记物ABCG2、CD133、CD44;(3)获得的JEG-3肿瘤干细胞具有高迁移力、高增殖力、自我更新能力、多向分化能力等肿瘤干细胞特性。图10幅,表4个,参考文献57篇