云南地不容(Stephania yunnanensis Lo)是防己科千金藤属山乌龟亚属藤本植物。所含主要化学成分克班宁(Crebanine)具有较强抗心律失常的药理活性。本研究在云南地不容居群形态性状和常规染色体研究的基础上，开展云南地不容DALP和ITS序列的DNA指纹图谱、云南地不容12种生物碱的化学指纹图谱研究，并与同亚属植物地不容(S.epigaea Lo)、齿叶地不容(S.dentifolia Lo et M。Yang)与河谷地不容(S.intermedia Lo)等作对比研究。同时，对云南地不容中提取的克班宁进行了部分药学研究。试图为云南地不容及其山乌龟亚属的系统与进化、植物化学和药学研究提供有价值的基础资料；同时，为选育优良种质资源、生药质量控制以及合理保护和开发利用该药用植物资源提供理论依据。研究内容具体如下： 1.云南地不容居群形态变异式样调查统计了云南地不容9居群、对比类群5种11居群的42个形态性状；补充描述《中国植物志》中未见的云南地不容雌花与雌花序、齿叶地不容果核的性状。采用SAS9.0统计软件分析。 2.云南地不容及6种山乌龟亚属植物的核型应用常规压片法进行核型研究。云南地不容染色体数目为2n=2x=26，为小染色体。核型公式为：K=2n=26=4m+22sm。属2B类核型，染色体相对长度系数IRL组成为2n=26=2L+10M2+10M1+4S,7种植物核型类型与相对长度系数IRL有一定的变异。 3.云南地不容遗传结构采用DALP(Direct amplification of lengthpolymorphism)分子标记技术，对云南地不容的10个居群及地不容的3个居群遗传多样性和遗传结构进行研究。 4.地不容和齿叶地不容居群遗传结构及山乌龟亚属6种植物种间遗传关系应用DALP分子标记技术，筛选出5个引物组合，扩增共产生287条DNA片段，地不容6个居群有258条谱带具有遗传多念性，地不容PPB=89.90％，Na=1.8990，Ne=1.5273，H=0.3146，I=0.4732；居群水平的平均PPB=67.77％、Na=1.6777、Ne=1.386、H=20.2297与，I=0.3466。齿叶地小容5个居群有253条谱带具有遗传多态性，物种水平PPB=88.15％、Na=1.8815、Ne=1.4904、H=0.2968、I=0.4495；居群水平PPB=1.6070、Na=1.6070、Ne=1.3552、H=0.2103、I=0.3163。 5.云南地不容及其同属13种植物的ITS序列变异式样对采自云南的千金藤属植物6个野生种的rDNA的ITS区进行序列测定，并与Genbank中的8个同属种的ITS系列进行比较。 6.云南地不容的化学成分变异式样采用高相液相色谱(HPILC)法测定了云南地不容10个居群与对照类群5居群的12种生物碱含量，采用SAS9.0统计软件进行分析。 7 云南地不容的HPLC指纹图谱建立云南地不容HPLC指纹图潜，以综合评价药材质量。 8 克班宁的药学研究 (1)克班宁对照品制备与结构确证采用重结晶法精制克班宁，以HPLC法和TLC法检查纯度，紫外(UV)、红外(IR)、质谱(MS)、氢谱(1H-NMR)、碳谱(13C-NMR)确证结构。纯化克班宁含量大于98％，符合含量测定用对照品要求。 (2)HPLC法测定克班宁注射剂原料药的有关物质(杂质) 应用HPLC法对不同来源的10批克班宁原料药样品进行测定，结果10批原料药有2个有关物质共有峰，其中5批有6个有关物质共有峰。该法为控制克班宁原料药有关物质的种类与含量提供了依据。 (3)克班宁注射剂的处方与制备采用L8(27)正交试验法，以可见分光光度法对其色泽变化进行考察，优选最佳制备工艺。配制0.25％克班宁注射剂的最佳工艺为，以盐酸为成盐用酸，pH为4.4，以NaHSO3为抗氧剂，熔封通CO2且避光保存。 (4)克班宁急性毒性与抗心律失常活性采用改良寇氏法考察小鼠静注LD50，BaCl2致大鼠心律失常观察Cre的治疗与预防作用;结果克LD50为9.382mg/l(g，95％可信限为8.314～10.600mg/kg；治疗组与预防组iv Cre2.5mg/kg可使大鼠恢复窦律，与对照组相比，差异有显著性意义。Cre有一定的毒性，对大鼠实验性心律失常具有治疗与预防作用。 (5)克班宁注射剂在家兔体内的药动学参数家兔静脉注射克班宁后一定时间分次采血，HPLC法测定血清中克班宁浓度，以DAS软件拟合药动学参数。结果表明克班宁注射剂在家兔体内成二室模型。主要药动学参数为：t1/2α=(3.25±0.22)min，t1/2β=(36.67±5.52)min，Cmax=(1.40±0.06)mg/L，Vd=(5.93±0.88)L/kg，CL=(0.051±0.003)L/min·kg。克班宁静注在家兔体内为超速处置类(t1/2