【摘 要】
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根据差异蛋白质组学方法对间期和有丝分裂期中心体的成分分析,运用质谱技术鉴定不同时期细胞总蛋白及不同时期中心体蛋白的双向电泳图谱上的部分差异蛋白点,得到三类中心体相关
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根据差异蛋白质组学方法对间期和有丝分裂期中心体的成分分析,运用质谱技术鉴定不同时期细胞总蛋白及不同时期中心体蛋白的双向电泳图谱上的部分差异蛋白点,得到三类中心体相关蛋白:间期和有丝分裂期中心体样品共有蛋白、间期中心体成分相关蛋白和有丝分裂期中心体成分相关蛋白。其中9个为已知的间期或有丝分裂期特异性中心体蛋白,约20个可能参与细胞周期调控、信号转导以及微管相关事件的中心体周期特异性候选蛋白。选取2个候选蛋白C80rf2和CDC10 isoform2(Septin 7)进行亚细胞定位研究。
结果显示,C80rf2在细胞分裂间期和有丝分裂中期均与中心体共定位。并且其亚细胞定位与细胞骨架密切相关,其可能是1个新的联系中心体与微管的蛋白。原核表达C80rf2蛋白,并制备多克隆抗体。同时利用GST-pull down技术研究其相互作用蛋白,目前相关载体构建及原核表达已经完成,最后的实验结果正在处理中。
在对另外一个候选蛋白CDC 10 isoform 2的研究过程中,发现了CDC10的一个新转录本。片段长度为1287bp,编码428个Aa,表观分子量约50KD。暂时将其命名为CDC10isoform3。通过人不同组织表达分布分析揭示这个新转录本在结肠、睾丸、心脏、胎盘、肝、小肠、骨骼肌中表达量较丰富,在脾、前列腺中有较弱表达。在甲状腺、卵巢、白细胞、脑、肾脏、胰腺中则检测不到其表达。对其进行亚细胞定位研究,显示这个新转录本编码的蛋白在细胞分裂间期和有丝分裂期的前期、中期和末期都与中心体共定位,而在有丝分裂后期消失。并且在个别细胞的有丝分裂前中期观察到蛋白在整个细胞中呈点状分布现象。为了得到能够特异识别新转录本的抗体,设计了抗原肽并制备获得CDC 10 isoforrn 3的抗体。利用得到的抗体进行免疫共沉淀分析CDC10 isoform3的相互作用蛋白。并设计新转录本的siRNA,希望通过RNAi实验揭示这种新蛋白对细胞分裂的影响。目前载体构建已经完成,正在筛取稳转克隆。
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