猪圆环病毒2型（porcine circovirus2,PCV2）感染猪体通常引起猪的圆环病毒相关疾病(porcine circovirus-associated diseases,PCVAD)。这些疾病包括先天性震颤(congenitaltremors,CT)、断奶仔猪多系统衰弱综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)、猪皮炎与肾病综合征(porcine dermatitis and nephropathy syndrome,PDNS)、猪呼吸道疾病综合征(porcinerespiratory disease complex,PRDC)、繁殖障碍(reproductivefailure)、肉芽肿性肠炎(granulomatous enteritis)等疾病，PCV2不断出现新的基因型，难以得到及时有效地预防和控制，严重制约养猪业的发展。　　本实验主要采集广西省不同养殖场中疑似PCVAD感染猪只的组织病料，旨在分离到PCV2，同时，分别以杆状病毒表达系统表达PCV2 ORF2重组蛋白和PCV2为免疫原免疫小鼠，旨在获得特异性针对PCV2的单克隆抗体，为PCV2诊断和疫苗的研究奠定基础。具体包含3方面的研究：　　1.猪圆环病毒2型（PCV2）的分离鉴定　　采集疑似PCVAD的病料81份，进行DNA及RNA的提取，分别用常规PCR的方法鉴定PCV2、PPV1、PRV、CSFV病毒，选取PCV2条带较亮，且无PPV1、PRV、CSFV的病料用PK-15细胞进行PCV2的分离。在PK-15细胞中盲传5代后，用PCR的方法扔能检测到PCV2，进而通过PCV2全基因序列引物进行全基因组测序，克隆入PMD-18T载体并进行测序，序列分析显示该毒株属于PCV2为2d型。之后用IFA的方法也验证了PCV2分离成功。　　2.PCV2 ORF2重组蛋白和PCV2病毒的纯化　　将本实验室构建的表达PCV2 ORF2重组杆状病毒AC-ORF2感染Sf9细胞，进而通过层析柱和超滤管浓缩的方法纯化PCV2 ORF2重组蛋白，通过SDS-PAGE和BCA的方法检测蛋白的纯度和浓度，结果显示浓度达到227.5μg/ml，另外，将PCV2感染PK-15细胞，扩大培养后通过蔗糖密度梯度离心的进行纯化，荧光定量PCR测定PCV2拷贝数达到3.9*108， BCA方法测定PCV2的浓度达到251.6μg/ml。结果表明纯化PCV2 ORF2重组蛋白和PCV2均达到小鼠免疫所用的抗原量，用于后期的研究。　　3.猪圆环病毒2型（PCV2）单克隆抗体的制备　　将PCV2 ORF2重组蛋白和PCV2病毒以50ug/只分别免疫6周龄的雌性BALB/c小鼠，三次免疫后，测定小鼠血清效价104以上，进而取免疫后小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合，并通过间接ELISA方法进行筛选。3次亚克隆后获得8株能稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞，分别命名为4C11，1H9，5B8，5C1，4F12（Cap蛋白免疫获得）；4E12、4A8、3E5（PCV2免疫获得）。IFA和Western blot试验说明，8株杂交瘤细胞分泌的抗体能与ORF2重组蛋白作用。特异性实验表明，4F12、4E12株单抗与猪圆环病毒2型（PCV2d）特异性反应，经抗体亚型鉴定1H9、4C11、5B8、5C14株亚型为IgG1/Kappa，4F12株为 IgG2b/Kappa，4E12、4A8、3E53株为IgM/Kappa，1H9、4C11、5B8、5C1、4F12、4E12、4A8、3E5株小鼠腹水效价分别为217,212,220，217,217,28,26,27，经IFA和Western blot试验说明，本研究获得与PCV2和PCV2 ORF2重组蛋白特异性作用的单克隆抗体。