论文部分内容阅读
动物流感造成全球畜牧业的巨大经济损失,能够跨宿主屏障感染人类,引发严重的公共卫生问题,造成该疾病的病原为流感病毒。流感病毒在进化过程中不断发生变异,其基因组突变和重组会造成抗原漂移及抗原转变,获得感染更多新宿主的能力,持续产生出危害动物和人类健康的新病毒。也正是该特点使得针对病毒研制的疫苗需要随着病毒的进化而更新,靶向作用于病毒蛋白的药物逐渐产生耐药的问题。因此,完善病毒与宿主相互作用机制的研究对抗病毒显得尤为重要。本研究利用KCa1.1的小分子拮抗剂Paxillines与特异性siRNA干扰技术相结合的方法,在A549与293T细胞系上对宿主因子KCNMA1分别进行功能抑制和下调表达处理,从而探究KCa1.1对包括H1、H5、H7和H9亚型在内的六株流感病毒(WSN,GD1330,FJ1660,AH1,SD008-627K和SD007)复制情况的影响。结果表明,KCNMA1所编码的KCa1.1能够帮助流感病毒在细胞上建立感染。为了探究宿主因子KCNMA1影响流感病毒生命周期的具体阶段,运用qPCR与影像技术在A549细胞系上分别评估H1、H5、H7和H9亚型流感病毒内吞效率,结果表明KCa1.1能够帮助多种亚型流感病毒完成内化过程。流感病毒HA蛋白在病毒粒子内吞过程中发挥关键作用,为了进一步阐明KCa1.1发挥作用的机制及相关通路,本研究利用免疫沉淀(IP)与shotgun质谱结合的方法筛选得到了与H5、H7亚型流感病毒HA蛋白相互作用的宿主膜蛋白,并对筛选得到的蛋白质数据库进行了基因本体论(GO)分析。同时也鉴定出在病毒感染情况下与KCa1.1存在相互作用的宿主膜蛋白,为进一步揭示KCa1.1帮助流感病毒完成内吞作用的机制提供了基础数据。关于流感病毒早期入侵宿主细胞的相关研究尚不完善,本研究揭示了宿主蛋白KCa1.1能够影响多种亚型流感病毒的内化过程,丰富了流感病毒与宿主相互作用的生命周期网络,证明宿主因子KCNMA1有潜力作为新的药物靶点。