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目的：研究K562白血病细胞在与BMSCs（Bone marrow stromal cells）接触和隔离培养条件下对其增殖及造血负调因子表达的影响，以阐明白血病细胞与BMSCs相互作用中，白血病细胞对BMSC生物学特性及BMSCs对白血病细胞增殖特性的影响。方法：1、研究对象：正常骨髓标本共9例和CML病人骨髓标本共15例分别来源于西南医院和新桥医院血液内科实验室志愿者。2、实验材料：K562细胞株来自第三军医大学分子遗传教研室。隔离培养器自制。3实验方法：（1）细胞培养：正常BMSCs在第10d，慢粒BMSCs在第15天出现集落间融合，加入K562与BMSCs直接接触与用隔离膜两种方式培养，为时相点开始记时点。（2）、实验分组：分为慢粒（6例标本）和正常BMSCs（3例标本）两大组：每大组又分对照组：细胞单独培养组；隔离培养组；接触培养组。（3）、检测方法：以培养第2d、4d、7d、12d为检测时相点，用显微镜观察BMSCs及K562生长增殖情况；用ELISA法检测培养上清的TGF-β1及MIP-1α含量；原位杂交法检测BMSCs中MIP-1α及TGF-β1mRNA的表达；TUNEL法检测BMSCs与K562细胞的凋亡；用流式细胞仪检测BMSCs周期的时相点有所不同，分别在培养后第2d、3d、5d、7d检测。结果：1、隔离培养时K562对正常BMSCs的影响（1）对BMSCs生长的影响：对照组在各个时相点细胞数量没有显著变化，与K562隔离培养BMSCs在第12d时数量才显著减少。（2）BMSCs分泌TGF-β1、MIP-1α的变化：对照组TGF-β1、MIP-1α水平在各时相点无显著变化，隔离培养时TGF-β1水平升高到第4d达到最高，与对照组和K562的累计值有显著差异，而MIP-1α水平升高到4d与对照组显著差异（P<0.01），以后各时相点间无显著差异。（3）BMSCs内TGF-β1 mRNA、MIP-1αmRNA表达变化：隔离培养TGF-β1 mRNA、MIP-1αmRNA阳性率升高到第4d，与相应对照组有显著差异（P<0.01）。（4）BMSCs周期的变化：隔离培养第3d、第7d BMSCs G2期显著高于对照组（P<0.05），第5d与对照组有非常显著差异（P<0.01）。（5）BMSCs凋亡的变化：隔离培养时BMSCs凋亡与对照组没有显著差异。2、隔离培养时K562对慢粒BMSCs 的影响（1）对慢粒BMSCs生长的影响：与K562培养前，慢粒BMSCs的集落形成时间和集落融合时间明显晚于正常BMSCs。加入K562<WP=8>后，对照组在第12d时相点时细胞数量显著减少，隔离培养BMSCs也在第12d时数量显著减少。（2）慢粒BMSCs分泌TGF-β1、MIP-1α的变化：对照组TGF-β1、MIP-1α水平在各时相点无显著变化，隔离培养时TGF-β1水平升高到第4d达到最高，而MIP-1α水平升高到4d有显著差异（P<0.01），以后各时相点间无显著差异。（3）慢粒BMSCs内TGF-β1 mRNA、MIP-1αmRNA表达变化：隔离培养TGF-β1 mRNA、MIP-1αmRNA阳性率升高到第4d以后与对照组有显著差异（P<0.01）。（4）慢粒BMSCs周期的变化：隔离培养BMSCs G2期在第2d后就非常显著的高于对照组（P<0.01）。（5）BMSCs凋亡的变化：隔离培养第4d以后慢粒BMSCs凋亡就显著高于对照组（P<0.01）。3、接触培养K562对正常BMSCs 的影响（1）对BMSCs生长的影响：接触培养BMSCs也在第12d数量才显著减少，比隔离培养时减少更明显。（2）BMSCs分泌TGF-β1、MIP-1α的变化：接触培养时TGF-β1、MIP-1α水平都是逐渐升高, TGF-β1水平在第4d后与对照组和K562累计值有显著差异（P<0.01）。MIP-1α水平在第4d后与对照组有显著差异（P<0.01）。（3）BMSCs内TGF-β1 mRNA、MIP-1αmRNA表达变化：接触培养TGF-β1 mRNA 、MIP-1αmRNA阳性率逐渐升高，第4d后显著高于对照组（P<0.01）（4）BMSCs凋亡的变化：接触培养时BMSCs的凋亡在第4d以后就显著高于对照组（P<0.01）。4、接触培养K562对慢粒BMSCs 的影响（1）对慢粒BMSCs生长的影响：接触培养BMSCs在第7d时细胞数量显著减少，在第12d 时数量更显著减少。（2）慢粒BMSCs分泌TGF-β1、MIP-1α的变化：接触培养时TGF-β1、MIP-1α水平都是逐渐升高, TGF-β1水平在第4d后与对照组和K562累计值有显著差异（P<0.01）。MIP-1α水平在第4d后与对照组有显著差异（P<0.01）。（3）慢粒BMSCs内TGF-β1 mRNA、MIP-1αmRNA表达变化：接触培养TGF-β1 mRNA 、MIP-1αmRNA阳性率逐渐升高，第4d时显著高于对照组（P<0.01）（4）BMSCs凋亡的变化：接触培养时BMSCs的凋亡在第4d以后就显著高于对照组（P<0.01），在第7天达到最高。5、BMSCs对K562增殖与凋亡的影响（1）K562细胞增殖变化：各组培养中K562随时间而快速生长，在慢粒接触培养组中K562生长最快。第7d以后接触培养中的K562细胞生长显著快于隔离培养（P<0.05）。K562与慢粒BMSCs培养时，生长快于与正常 BMSCs培养，第4d以后有显著性差异（P<0.05）。（2）K562细胞凋亡的变化：与正常BMSCs培养时，其凋亡显著减少，隔离培养在第7d后有显著差异（P<0.05），接触培养在第4d就有显著差异（P<0.05）。K562细胞与慢粒BMSCs培养时，凋亡减少就更明显，隔离培养在第4d后有非常显著差异（P<0.01），接触培养时在第2d后就有非常显著差异（P<0.01）。结论：1、K562细胞可上调正常和慢粒BMSCs TGF-β1和MIP-1α的表达，造成正常造血的抑制，从而间接促进了K562