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目的：胸腺上皮性肿瘤是前上纵膈最常见的原发肿瘤,起源于胸腺上皮细胞或向胸腺上皮分化的干细胞。2004年,WHO根据胸腺瘤的上皮细胞形态、排列方式以及淋巴细胞在肿瘤组织中的比例,将胸腺瘤划分为A、AB、B1、B2和B3五种常见亚型,以及其他少见特殊类型。胸腺瘤的ICD-O行为编码为1,多项研究发现,虽然A、AB和B1型胸腺瘤基本上属于良性肿瘤,预后较好,但少数也可复发或转移;而B2和B3型胸腺瘤虽具有较高的侵袭性,预后相对较差,但也有少数病例呈良性经过。故探讨反映该类肿瘤生物学行为的标记物,对于肿瘤术后的治疗具有重要的指导性意义。
肿瘤转移相关基因2(MetastasisTumorAntigen2,MTA2)是新近发现的一个肿瘤候选基因——MTA(MTA1,MTA2,MTA3)家族的成员之一。MTA2蛋白是具有核小体重塑活性的组蛋白去乙酰基酶(nueleosomeremodelingdeacetylase,NuRD)的亚基。研究发现,MTA2与人类一些肿瘤如卵巢癌、乳腺癌、肝癌、非小细胞肺癌等的侵袭转移关系密切,是反映肿瘤生物学行为的很好的标记物。
MTA2是转录抑制因子Kaiso的下游靶基因,而P120连环蛋白(P120catenin,P120ctn)又可调节Kaiso的核浆分布和功能,但三者在胸腺瘤中的表达及关系是否能够反映胸腺瘤的生物学行为尚不清楚。本研究旨在探讨胸腺瘤中P120ctn、Kaiso和MTA2的表达情况及其与临床病理学参数的关系,并探讨这种表达及关系反映胸腺瘤的生物学行为的可能性。
材料与方法:
1、材料
标本来源于中国医科大学第一附属医院2007年12月～2011年8月经外科手术切除的胸腺瘤组织137例,其中男性59例,女性78例;年龄19～75岁,平均年龄51岁。肿瘤平均直径为5cm(1～15cm),伴有重症肌无力症状的6l例,不伴有重症肌无力症状的76例。标本由两位有经验的病理医师根据2004年WHO胸腺肿瘤组织学分类标准诊断:其中A型胸腺瘤11例,AB型胸腺瘤50例,B1型胸腺瘤22例,B2型胸腺瘤37例,B3型胸腺瘤17例。按照Masaoka的胸腺瘤临床分期:Ⅰ期胸腺瘤53例,Ⅱ期胸腺瘤31例,Ⅲ期胸腺瘤46例,Ⅳ期胸腺瘤7例。另外选取胸腺癌3例,胸腺瘤旁正常胸腺组织18例作为对照,患者术前均未接受过放化疗。
2、免疫细胞化学染色
将标本制成4μm连续切片,经脱蜡、脱苯、水化后,采用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化酶免疫组化法(S-P法)进行染色。鼠抗人p120ctn单克隆抗体(1:200,catalognumber:610134购自美国BDTransductionLaboratories公司)和鼠抗人Kaiso单克隆抗体(1:200,购自美国Millipore公司),兔抗人MTA2多克隆抗体(1:800ab8106购自英国abeam公司香港分公司)。一抗4℃孵育过夜。以本实验室已有的强表达的肺癌组织为阳性对照,以PBS缓冲液代替一抗为空白对照。SP染色超敏试剂盒(KIT-9710)、DAB显色剂(DAB0031)购自福州迈新公司。
3、结果判定
采用半定量评分标准,进行染色强度评分:无着色为0分,淡黄色颗粒为1分,棕黄色颗粒为2分,黄褐色颗粒为3分:阳性细胞百分比评分:每张切片随机选取5个高倍视野,每个高倍视野计数100个胸腺上皮肿瘤细胞。阳性细胞≤10%为0分,11%～25%为1分,26%～75%为2分≥76%为3分。阳性细胞百分比的评分与染色强度的评分相乘得到最终的评分。对于Kaiso,当最终评分≤1定义为阴性表达,≥2为阳性表达;P120ctn正常表达的阳性信号定位于细胞膜,当肿瘤细胞胞浆阳性表达,且最终评分≥2时定义为异位浆表达阳性:MTA2主要在细胞核中表达,胞浆同时略有表达,将最终评分≥2分定义为MTA2阳性表达。最终评分3-5分定义为中等阳性表达,最终评分≥6分定义为强阳性表达。
4、统计分析
各组资料应用SPSS13.0软件进行统计分析,P＜0.05为有统计学意义。
结果:
正常胸腺上皮细胞中P120ctn为细胞膜连续表达,kaiso和MTA2为阴性表达。P120ctn在胸腺瘤细胞中出现膜表达减弱和胞浆异位表达,胞浆异位表达率为76.6%(105/137)。Kaiso主要在胸腺瘤细胞浆中表达,阳性表达率为69.3%(95/137)。MTA2主要表达于胸腺瘤细胞核,阳性表达率为70.8%(97/137)。胸腺瘤细胞中P120ctn异位浆表达、Kaiso浆表达及MTA2的核表达两两间存在有较好的一致性(Kappa=0.559,P＜0.001;Kappa=0.512,P＜0.001;Kappa=0.652,P＜0.001)和相关性(r=0.733,P＜0.001;r=0.652,P＜0.001;r=0.708,P＜0.001),并与组织学分型及临床分期相关(P＜0.05)。High-risk(B2、B3型)胸腺瘤组的P120ctn、Kaiso胞浆表达及MTA2胞核表达均高于low-risk(A、AB和B1型)胸腺瘤组(P＜0.001),MasaokaⅢ/Ⅳ期胸腺瘤组均高于Ⅰ/Ⅱ期胸腺瘤组(P＜0.001)。
结论:
P120ctn和Kaiso同时胞浆表达和MTA2胞核表达增强与胸腺瘤组织学分型和Masaoka临床分期正相关,他们表达的定位和强度在一定程度上可反映出胸腺瘤的生物学行为。