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本论文选择黄芩等四味中草药组成的“三黄连”合剂为研究对象,实验观察“三黄连”合剂对罗非鱼链球菌病的预防效果,并进行安全性评价。进行了“三黄连”合剂体外抑菌实验;“三黄连”合剂以不同剂量添加于饲料,筛选其对罗非鱼链球菌感染的最佳保护剂量;以30mL/kg、60mL/kg、120 mL/kg饲料为低、中、高剂量组,以及氟苯尼考为阳性对照,观察“三黄连”合剂对感染无乳链球菌吉富罗非鱼的抗病力的影响;“三黄连”合剂添加于饲料,连续投喂7天,观察其对吉富罗非鱼相关免疫指标的影响,以研究“三黄连”合剂对海豚链球菌的抗病机制。通过实验动物测定了“三黄连”合剂的急性毒性以及最大耐受药量;进行了“三黄连”合剂对靶动物罗非鱼的安全性评价。结果表明,体外实验中,“三黄连”合剂在体外对6株链球菌均有一定的抑制效果;三黄连”合剂的最小抑菌浓度分别为:62.5 mg/mL、125 mg/mL、125mg/mL、125 mg/mL、125mg/mL、62.5 mg/mL;“三黄连”合剂按40 mL/kg、60 mL/kg、120 mL/kg饲料添加,均能降低感染链球菌罗非鱼的死亡率,以60 mL/kg添加剂量组效果最佳;30 mL/kg、60 mL/kg、120 mL/kg剂量的“三黄连”合剂和0.05 g/kg氟苯尼考都可显著降低感染链球菌吉富罗非鱼的死亡率,60 mL/kg、120 mL/kg剂量组预防效果优于于0.05g/kg氟苯尼考对照组;感染海豚链球菌后,罗非鱼免疫功能下降。“三黄连”合剂连续给药7天,对吉富罗非鱼血清免疫指标均有一定的影响,其中30 mL/kg、60 mL/kg、120 mL/kg“三黄连”合剂添加剂量可显著提升吉富罗非鱼超氧化物歧化酶(SOD)活性;60 ml/kg添加剂量可显著提高血清补体C3水平。感染7d后,“三黄连”合剂各给药组与感染不给药组相比,超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶、补体C3、IgM抗体等免疫指标活性均显著升高。提示“三黄连”合剂具有免疫调节作用急性毒性实验结果表明,“三黄连”合剂为实际无毒,最大耐受药量为20 g/kg。“三黄连”合剂临床推荐剂量的1倍、3倍、5倍、10倍剂量对试验鱼的体重、肝脏、脾脏指数均无显著性的影响。但5倍、10倍剂量对试验鱼谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、血糖等水平有一定的影响,病理组织学观察发现肝脏细胞结构受损、细胞间隔模糊、细胞核不清晰,表明“三黄连”合剂在临床应用时应控制在临床推荐剂量的3倍以下。本研究结果表明,“三黄连”合剂体外对罗非鱼致病性无乳链球菌、海豚链球菌均有一定的抑制效果。60 mL/kg饲料添加剂量为“三黄连”合剂预防罗非鱼链球菌病的最佳剂量。60 mL/kg、120 mL/kg剂量“三黄连”合剂可有效降低感染无乳链球菌罗非鱼的死亡率,提高吉富罗非鱼的相关血清免疫指标水平,增强罗非鱼机体的免疫力;“三黄连”合剂属于实际无毒物质,在3倍给药剂量下对靶动物罗非鱼是安全的。在临床使用中,建议“三黄连”合剂预防罗非鱼链球菌病的添加量为60 mL/kg饲料。