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目的肿瘤干细胞理论的提出为认识肿瘤提供了新的思路,越来越多的肿瘤干细胞已经得到分离和鉴定;本文旨在应用无血清培养基分离胰腺癌细胞球,并检测其miR-590-3p的表达。方法运用无血清培养基克隆培养ASPC-1,PANC-1细胞,检测其自我更新及分化、细胞周期、侵袭实验、成瘤能力和表面标记物CD24/CD44表达等,验证其肿瘤干细胞特性。荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测miR-590-3p在胰腺癌细胞球中的表达。结果少量ASPC-1和PANC-1细胞在无血清培养基中能存活,呈克隆球样悬浮生长,并可以在体外连续传代,加入血清后细胞球帖壁分化。ASPC-1,PANC-1细胞球G0/G1期分别为(75.3±5.4) %,(80.1±4.7) %;ASPC-1和PANC-1细胞球的平均穿膜细胞数分别为147.3±18.6,113.2±12.9个,较细胞系具有较强的侵袭能力;ASPC-1和PANC-1细胞球移植形成肿瘤所需最少细胞数为5×105个,其成瘤能力是普通细胞系的100倍;ASPC-1,PANC-1细胞球CD24+CD44+比例分别为0.38%-0.43%,4.91%-5.21%,高于细胞系中的表达(P<0.05);ASPC-1,PANC-1细胞球miR-590-3p表达分别是细胞系的4.67,4.52倍(P <0.05)。结论应用无血清培养基可以从ASPC-1,PANC-1细胞系中分离出具有干细胞特性的胰腺癌细胞球,其miR-590-3p表达上调,可能是胰腺癌干细胞特性维持的关键基因。