新城疫（ND）是由新城疫病毒（NDV）引起的具有高度传染性的家禽传染病，给世界各国的养禽业带来严重的经济损失。随着NDV疫苗的广泛应用，ND的流行虽得到控制，但是其流行趋势却在发生变化，如非典型性ND、病毒新基因型出现和致病性宿主范围扩大等给临床ND的防控来带很大困难。HN蛋白是位于NDV囊膜表面的一种主要结构蛋白、病毒保护性抗原之一，它在抗原性的决定等方面具有重要作用。本研究在分析河南部分地区NDV分子流行病学的基础上，利用原核表达系统获得了新乡地区致病株ND xx08株HN主要抗原区重组蛋白，利用纯化的重组HN蛋白建立检测ND抗体的间接ELISA方法。　　通过鸡胚接种病毒收获尿囊液，血凝（HA）及血凝抑制（HI）试验检测其血凝活性，利用RT-PCR技术扩增NDV F蛋白裂解位点处重要功能区基因片段，同时进行序列测定，构建NDV遗传进化树，分析其遗传关系。结果显示从发病死亡鸡体内分离到6株具有血凝活性的NDV，遗传进化分析表明：6株NDV分离株均属ClassⅡ、基因Ⅶ型，F蛋白裂解位点处氨基酸序列为112RRQKRF117，具有典型的强毒株特征，F蛋白氨基酸同源性在82.5％-97.6％之间。　　在上述流行病学的基础上，利用PCR技术扩增出流行毒株NDV HN主要抗原区基因片段，将目的基因片段克隆于 pMD18-T-vector载体，构建重组克隆质粒命名为pMD-rHN，经 PCR、双酶切和测序鉴定正确后，回收目的基因，将目的基因克隆于原核表达载体pET-28a(+)，构建重组表达质粒，命名为pET28a-rHN。经IPTG诱导表达，优化表达条件，SDS-PAGE和Western-blot鉴定表达产物。扩大诱导培养，超声破碎收集菌体，采用Ni-NTA亲和树脂进行纯化。结果显示，IPTG浓度在0.2mmol/L，30℃诱导4h目的蛋白获得高效表达，其分子量为28KDa，可溶性分析表明重组蛋白以包涵体的形式存在。Western-blotting鉴定结果显示，重组蛋白能够与鸡NDV高免血清发生反应，经Ni-NTA亲和树脂进行纯化后，得到浓度为0.8 mg/mL的重组蛋白。　　以纯化的HN重组蛋白为包被抗原建立了检测NDV血清抗体的间接ELISA检测方法。优化ELISA工作条件，确定抗原最适包被浓度为5μg/mL，血清最适稀释比例为1:80，其最佳反应时间为40min，酶标二抗最佳工作浓度为1:1000，其最佳反应时间为30min，以X+3SD=0.220作为阴、阳性血清判定的临界值。与HI试验比较其特异性为92.85％，敏感性为91.2％，准确性可达到91.95％，k值是0.979，说明所建立的ELISA方法与HI试验符合率比较高，并与鸡传染性法氏囊病毒（IBDV）、鸡传染性支气管炎病（IBV）、鸡禽流感病毒（AIV）和鸡马立克氏病毒（MDV）等标准阳性血清无交叉反应。表明所建立的ELISA方法与HI试验具有高度的一致性且具有良好的特异性，为NDV抗体的检测、监测及流行病学调查奠定基础。