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刺槐(Robinia Pseudocacia L.)是一种速生、耐旱的多用途树种,可作为水土保持、蜜源和饲料树种。转基因提高刺槐对逆境胁迫的耐(抗)性,将为干旱或盐碱问题的土壤利用、植被恢复提供急需的林木种质资源。DREB转录因子是与DRE元件特异结合,在干旱、高盐或低温胁迫条件下调控功能基因的表达。DREB转录因子和DRE元件在干旱、高盐及低温胁迫信号传递中起重要作用。一个DREB转录因子可以调控多个与植物干旱、高盐及低温耐性有关的功能基因的表达。因此,利用转录因子采改良植物抗逆性,能获得较为理想的综合效果。在建立的匈牙利速生型刺槐遗传转化再生体系的基础上,通过GUS组织染色法研究了影响转化效果的各因子,建立高效转化体系。利用该体系通过农杆菌介导的叶盘法将拟南芥DREB基因导入匈牙利速生型刺槐中,在附加一定浓度抗生素的培养基上诱导获得不定芽,经过PCR和Southern blotting检测,初步证明得到转DREB基因植株。结果如下:1、建立了速生型刺槐遗传转化再生体系:以速生型刺槐叶轴为外植体,在培养基MS+6-BA1.0 mg/L +NAA0.5 mg/L +蔗糖30g/L+琼脂6g/L上诱导愈伤组织并分化不定芽,不定芽分化率为77.5%。诱导生根以培养基1/2MS + NAA 0.2mg/L+IBA 0.1mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L为最佳。生根的植株,先在室内炼苗然后通过两步法移栽,成活率达90%以上。2、建立了速生型刺槐的高效转化体系:以速生型刺槐叶轴为外植体,预培养0~2d后,用附加100μmol/L乙酰丁香酮的根癌农杆菌菌液侵染外植体15~20min,接种在附加100μmol/L乙酰丁香酮和Hyg 7 mg/L的愈伤组织诱导和不定芽分化培养基上共培养2d,有利于获得最高转化效率。3、在以上建立的转化体系基础上,通过农杆菌介导逆境诱导转录因子DREB基因转化匈牙利速生型刺槐,获得了抗潮酶素的31株初选植株。PCR检测其中11株为阳性, PCR-Southern和Southern blotting检测显示外源DREB基因已经整合到了刺槐基因组中。