力竭运动及钝挫伤对大鼠骨骼肌卫星细胞体外增殖及AMPK/TSC2/mTOR的影响

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目的:研究力竭运动及钝挫伤对大鼠肌卫星细胞及AMPK、TSC2、mTOR的影响,探究骨骼肌损伤修复过程,为骨骼肌损伤修复提供理论依据。方法:选取24只SD雄性大鼠,随机分成4组,每组6只。分别是安静对照组(Control, C)6只;力竭运动组(Exhaustive exercise group)18只:力竭运动组进行一次力竭性下坡跑运动达到力竭状态,并取即刻组(Exhaustive, EO)、力竭后24h组(E24)、力竭后48h组(E48)。力竭组和安静对照组分别于力竭运动后不同时间点和安静状态下麻醉,宰杀取血,并取下右侧股四头肌,股四头肌一分为二,一份立即进行细胞培养实验,一份-80。保存待检测AMPK、TSC2、mTOR的含量及变化。钝挫伤组:另选6只SD雄性大鼠,分为钝挫伤即刻组(Contusion, DO)、钝挫伤24h组(D24)、钝挫伤48h组(D48),进行麻醉,摘取右侧股四头肌,立即进行细胞培养实验。另取新生鼠3只,亦取股四头肌进行细胞培养实验。结果:1、根据肌卫星细胞培养结果显示:安静对照组无明显肌卫星细胞出现;力竭组与钝挫伤组相比肌卫星细胞含量较少,增殖速度相对缓慢,钝挫伤组肌卫星细胞含量较多,且增殖速度快于力竭组,两者之间差异较明显。结果可见,到第五天时各组开始大量增殖,第七天时达到增殖的高峰,随后增殖速度下降。新生鼠组肌卫星细胞含量较高,增殖速度最快,培养第二天便可见梭形细胞,之后便大量增殖。2、ELISA结果显示:力竭运动即刻组骨骼肌、血清中AMPK、TSC2含量较对照组明显上升,且有极显著差异(P<0.01);力竭后24h、48h组骨骼肌、血清中AMPK、TSC2含量较对照组无明显变化。力竭运动即刻组骨骼肌、血清中mTOR含量较对照组明显下降,差异极显著(P<0.01):力竭后24h、48h组骨骼肌、血清中mTOR含量较对照组无明显变化。且E24组与E48组间均无显著性差异。结论:1、肌卫星细胞培养结果显示,力竭运动与钝挫伤相比,钝挫伤对骨骼肌卫星细胞有较好的激活作用,虽然两者都能使骨骼肌卫星细胞激活,而对照组则无明显肌卫星细胞培养出,说明成年大鼠在安静状态下骨骼肌卫星细胞处于静息状态。力竭组与钝挫伤组相比较,钝挫伤组肌卫星细胞增殖更快、更明显,说明钝挫伤组损伤更严重,刺激更强;新生鼠在未受刺激的条件下,其卫星细胞数量更多,增殖能力更强,表明新生鼠体内的肌卫星细胞并未处于静息状态。2、力竭运动即刻组的AMPK、TSC2含量明显高于其余各组,而mTOR含量则低于其余各组,且有显著性差异,提示力竭运动中AMPK可能被激活,同时磷酸化TSC2进而抑制mTOR的合成。
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