论文部分内容阅读
目的:研究林蛙油中激素类成分的种类及含量,建立不同产地的林蛙油中雌二醇的含量测定方法,并与虾仁、鱼肉等普通食品中雌二醇的含量比较分析。探讨林蛙油对机体生长、激素水平、人体乳腺癌细胞增殖及性腺激素受体表达的影响。方法:利用气相质谱联用(GC-MS)的方法,对林蛙油中含有的激素类成分的种类及相对含量进行测定。利用高效液相色谱法(HPLC),对不同产地的林蛙油及其他常用普通食品中雌二醇的含量进行测定。采用雌性昆明小鼠24只,随机分为高剂量组、低剂量组和空白组。给药组灌胃林蛙油,空白组灌胃生理盐水,给药结束后,取各组小鼠的卵巢、子宫及肾上腺称湿重,并对其组织切片进行了病理形态学观察,取血清测激素水平。通过MTT法与空白组、溶剂组及雌二醇组比较,测定出林蛙油组对人体乳腺癌细胞增殖的活力。利用Western Blot方法检测小鼠子宫、卵巢及肾上腺蛋白组织中FSHR、TβRⅠ及TβRⅡ受体的蛋白表达。结果:经过初步分析,林蛙油中主要含有的激素类成分为0.33%乙酸雄甾酮、0.35%前列腺素、0.52%美屈孕酮、23.94%胆固醇及0.87%雌二醇。不同产地的林蛙油中雌二醇含量比较,安图产林蛙油中雌二醇的平均含量为5.24μg/g,桦甸产林蛙油中雌二醇的平均含量为6.50μg/g,汪清产林蛙油中雌二醇的平均含量为7.97μg/g,通化产林蛙油中雌二醇的平均含量为6.39μg/g,旺起产林蛙油中雌二醇的平均含量为4.21μg/g,抚松产林蛙油林蛙油中雌二醇的平均含量为7.65μg/g。林蛙油与其他普通食品中雌二醇含量比较,虾仁中雌二醇的平均含量为2.02μg/g,鱼肉中雌二醇的平均含量为1.09μg/g,蛋黄中雌二醇的平均含量为0.303μg/g,猪肉中雌二醇的平均含量为0.934μg/g,奶粉中雌二醇的平均含量为1.75μg/g。利用MTT法,与空白组比较,溶剂组对细胞活力无明显影响,说明溶剂DMSO在2.5‰的浓度下对细胞无影响,与雌二醇对照组比较,林蛙油组在48小时内具有一定的促进人乳腺癌细胞增殖的作用,尤其是在低浓度2.5ng/ml,0.25ng/ml时促增殖作用明显,但无统计学意义(P>0.05),在72小时内林蛙油对人乳腺癌细胞增殖作用不明显。林蛙油对雌性小鼠体重、子宫湿重、卵巢湿重及肾上腺湿重均无显著影响,血清内E2及P的含量显著增加(p<0.05),FSH的含量显著增加(p<0.01),T的含量显著增加(p<0.001),PRL和LH的含量变化无显著差异。林蛙油高剂量给药组肾上腺蛋白组织FSHR的表达水平升高(p<0.05),其他组变化不显著。结论:本试验方法可靠、有效、稳定,可以用于林蛙油及其他普通食品雌二醇含量的测定分析。细胞实验结果表明林蛙油对人乳腺癌细胞增殖作用不明显。药理实验结果表明长时间大剂量服用林蛙油,在一定程度上会引起机体内的E2、T、FSH和P激素水平的变化及FSHR蛋白表达的增高,具有一定的雌激素样作用。