论文部分内容阅读
橄榄（Canarium album（Lour.）Rauesch）为橄榄科橄榄属常绿乔木,橄榄果实为卵圆形,呈青色,也称青果、青子、青橄榄、白榄、青榄等,是一种药食兼用植物资源,其有效活性成分为橄榄多酚类物质,具有抗菌、抗病毒、解热、保肝利胆、免疫调节、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基等作用。本实验以重庆本地产橄榄为实验材料,从中提取多酚类物质,并进行纯化、测定抗氧化性能。实验采用微波辅助提取法,通过四元二次通用旋转设计确定了橄榄多酚的最佳提取工艺;探索了大孔树脂AB-8对橄榄多酚纯化的最佳条件;对经过AB-8树脂纯化所得的橄榄多酚类物质与常用抗氧化剂作对比,通过对油脂的抗氧化作用、还原能力、清除H2O2、羟基自由基·OH、超氧阴离子自由基（O2-·）、亚硝酸盐（NO2-）这六种体系研究橄榄多酚提取物的抗氧化性能;采用超高效液相色谱法测定了橄榄多酚的部分活性成分。研究结果如下:（1）用FC法测定结果稳定,当以没食子酸为标准品时,在0.05～0.30mg/mL浓度范围内线性较好,标准曲线方程为Y=0.3309X—0.0237,其R2值为0.999:FC法精密度高、重现性好,六次重复测定的RSD值仅为0.938%:该法回收率较高,在六次加样回收率实验中,其平均加样回收率达到99.59%,RSD值为0.404%。（2）微波辅助提取二次回归正交旋转组合设计实验结果表明:提取时间（X1）、微波功率（X2）、料液比（X4）三个因素对多酚提取效果的影响达到极显著水平,且提取时间（X1）与料液比（X4）之间交互作用显著;四个因素对橄榄多酚提取效果的影响大小顺序为:X4（料液比）＞X1（提取时间）＞X2（微波功率）＞X3（乙醇浓度）;通过DPS软件分析,得到了本实验最佳提取参数为:提取时间50s,微波功率600W,乙醇浓度70%,料液比1:25;在此条件进行实验,得到提取量平均值为101.85 mg/g,与DPS软件给出的理论计算值102.49 mg/g相差0.62%;另外,通过对实验结果的优化,得到了以四个因素为自变量、以多酚提取量为因变量的回归方程:Y=96.2571+4.05375X1+2.19958X2+4.67125X4-2.65731X12-1.0823IX22-2.90731X32-2.59481X42+1.64562X1X4（3）不同树脂对橄榄多酚的吸附效果不同,在所选的五种大孔树脂中AB-8为橄榄多酚粗提液纯化的最佳树脂材料;AB-8树脂可以在4小时内快速吸附橄榄多酚;较高浓度的乙醇溶液对AB-8树脂上吸附的多酚具有很强的洗脱作用,浓度为70%的乙醇溶液在室温下静态洗脱4小时,可以达到90.72%的洗脱率。在大孔树脂AB-8动态吸附、洗脱实验中,通过不同提取液浓度、不同上样流速、不同乙醇浓度解析的实验表明:流速控制在1.0mL/min左右,上样浓度控制在2.34-3.51mg/mL,橄榄多酚吸附率最高;选择70%的乙醇进行解析,洗脱流速为1.0mg/mL,洗脱峰集中,对称,无明显拖尾现象,390mL体积的洗脱液基本上可以将20g树脂上的橄榄多酚完全洗脱下来。（4）经纯化后的橄榄多酚进行UPLC分析检测可知,在已知的四种酚类物质中,芦丁含量较高为0.694mg/L。由此可看出,在所纯化的橄榄多酚液中,黄酮类物质所占比重较大。（5）通过六种不同体系（食用猪油、、还原能力、清除H2O2、羟基自由基·OH、超氧阴离子自由基、亚硝酸盐）研究了橄榄多酚提取物的抗氧化性能。结果表明,在油脂体系中,橄榄多酚提取物添加量为0.70g/kg时,对猪油的抗氧化作用与添加0.2g/kgBHT的抗氧化作用相近。添加0.70g/kg橄榄多酚提取物的猪油在60℃的条件下储藏25天后,其过氧化值为13.46meq/kg,低于国家标准16meq/kg橄榄多酚有较强的还原能力。在所测定的质量浓度（0.24～0.42mg/mL）范围内,橄榄多酚的还原能力随着浓度的增加而增强,在浓度均为1.96mg/mL时,多酚反应生成物的A700值分别是BHT和抗坏血酸的1.84倍、1.58倍;在H2O2体系中,橄榄多酚提取物与抗坏血酸的清除能力几乎相当,BHT要弱于提取物和抗坏血酸。当抗坏血酸地浓度达到0.98mg/mL时,其清除率就达到了98.4%,而提取物的最大清除率为95.7%,BHT的最大清除率为84.5%;在羟基自由基·OH体系中,橄榄多酚提取物对反应体系中·OH的清除率高于抗坏血酸和BHT,在质量浓度为0.98mg/mL时,橄榄多酚提取物对羟自由基的清除率分别是抗坏血酸、BHT的1.20倍、3.62倍;在超氧阴离子自由基O2-·体系中,橄榄多酚提取物的清除能力要比抗坏血酸和BHT的清除超氧阴离子自由基的能力弱;在亚硝酸盐体系中,抗坏血酸对亚硝酸盐的清除作用较橄榄多酚强。