【摘 要】
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该研究运用噬菌体随机肽库筛选抗原表位的实验方法,得到了一系列HGV、HCV抗原的模拟表位,并进行鉴定:1、选用抗HGV E2的3株单克隆抗体M6、M13、M30,分别从噬菌体表面展示的随
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该研究运用噬菌体随机肽库筛选抗原表位的实验方法,得到了一系列HGV、HCV抗原的模拟表位,并进行鉴定:1、选用抗HGV E2的3株单克隆抗体M6、M13、M30,分别从噬菌体表面展示的随机15肽库、6肽库、9肽库中筛选抗原表位.经过富集良好的几轮筛选后,通过结合试验、竞争抑制试验及序列分析得到一些具有核心序列的阳性噬菌体克隆;初步鉴定阳性克隆的结合活性和免疫原性后,用合成多肽进行进一步功能鉴定,得到识别HGV M6抗体的3个模拟表位:NPLWP、WAWWDH、GYAPLSXVX,它们与HGV抗体M6结合的Kd值分别为89.5nM、64.7nM、22.1nM;实验还发现它们具有一定的协同作用.2、利用分子生物学原理和技术获得一个HCV复合多表位抗原后,用它构建亲和层析柱,从临床病人血清中纯化得到了HCV多克隆抗体;以此为配基,对以上3个噬菌体随机肽库进行筛选;通过几轮有效的筛选,得到一些与病人抗体特异性结合的噬菌体克隆;分析阳性克隆的序列后,合成肽进行功能鉴定,得到WPWS、SPVAPVLYT等可能用于研制诊断试剂和特异性疫苗的先导化合物.
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