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目的:
缺血性脑血管病是神经系统的常见疾病,其致残率及致死率均较高,是严重威胁人类健康的疾病。不断探索其疾病过程中的分子生物学机制,可以为找到更好的治疗方法打下基础。本实验通过检测大鼠实验性脑缺血再灌注模型缺血再灌注侧脑组织、非灌注侧相同部位脑组织载脂蛋白-J(Apo-J)mRNA的表达水平,分析其是否存在差异,并与空白对照组、假手术组比较,以及分析Apo-JmRNA的表达水平与脑水肿程度(脑含水量)是否存在相关性,从而为探索Apo-J在脑缺血再灌注的病理生理过程中的作用机制打下基础。
方法:
清洁级Wistar成年大鼠55只,首先分为空白对照组(5只)、假手术组(25只)、缺血再灌注组(25只)。假手术组、缺血再灌注组再随机分为6h组、1d组、3d组、5d组、7d组各5个亚组。
用ZeaLonga线栓法造大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注模型;用RNAisoReagent(ThKaRa产品)提取各组模型左侧、右侧相应部位脑组织的总RNA;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)在相应时间点检测各组模型相应部位的Apo-JmRNA的表达量;同时用检测脑干湿重的方法检测脑含水量(代表脑水肿程度)。比较各组Apo-JmRNA表达水平的差别,并分析其与脑含水量的关系。全部资料用SPSS13.0统计软件包进行统计分析,p<0.05为具有显著性差异,p<0.001为具有极显著性差异,p>0.05为无显著性差异。
结果:
1、Apo-JmRNA的表达
(1)各组模型缺血再灌注侧(左侧)与非灌注侧(右侧)之间的比较:①空白对照组:左侧与右侧无显著性差异(p>0.05);②假手术组:在6h~7d各组中,左侧与右侧比较均未见显著性差异(p>0.05);③缺血再灌注组:再灌注侧与非灌注侧比较,均存在显著性差异(其中,6h组、7d组p<0.01,1d组、3d组5d组p<0.001)。
(2)空白对照组、假手术组、缺血再灌注组之间的比较:分别在假手术组、缺血再灌注组按时间分组的各亚组之间左、右两侧脑组织分别进行比较,同时加入空白对照组(可忽略取脑标本时间的因素)进行比较。结果如下:缺血再灌注组再灌注侧(左侧)Apo-JmRNA显著高于空白对照组(p<0.001)、假手术组(p<0.001),而假手术组与空白对照组间无显著差异(p>0.05);而在非灌注侧(右侧),各组间两两比较均无显著性差异(p>0.05)。
(3)假手术组各亚组之间的比较:①左侧脑:从6h~7d组,用单因素方差分析比较各组,无总体差异(p>0.05);②右侧脑:从6h~7d组,比较总体间也无差异(p>0.05)。
(4)缺血再灌注组各亚组之间的比较:①缺血再灌注侧:总体比较存在显著差异(p<0.001),其中3d组最高。②非灌注侧:各亚组间无显著性差异(p>0.05)。
2、脑含水量的检测结果
(1)各组模型缺血再灌注侧(左侧)与非灌注侧(右侧)之间的比较:①空白对照组:左侧与右侧无显著性差异(p>0.05);②假手术组:在6h~7d各组中,左侧与右侧比较均未见显著性差异(p>0.05);③缺血再灌注组:再灌注侧与非灌注侧比较,均存在显著性差异(p<0.001)。
(2)空白对照组、假手术组、缺血再灌注组之间的比较:分别在假手术组、缺血再灌注组按时间分组的各亚组之间左、右两侧脑组织分别进行比较,同时加入空白对照组进行比较。结果如下:缺血再灌注组再灌注侧(左侧)显著高于空白对照组(p<0.001)、假手术组(p<0.001),而假手术组与空白对照组间无显著差异(p>0.05);而在非灌注侧(右侧),各组间两两比较均无显著性差异(p>0.05)。
(3)假手术组各亚组之间的比较:①左侧脑:从6h~7d组,用单因素方差分析比较各组,无总体差异(p>0.05);②右侧脑:从6h~7d组,比较总体间也无差异(p>0.05)。
(4)缺血再灌注组各亚组之间的比较:①缺血再灌注侧:总体比较存在显著差异(p<0.001),其中3d组最高。②非灌注侧:各亚组间无显著性差异(p>0.05)。
3、Apo-JmRNA表达与脑含水量的相互关系
为观察Apo-JmRNA的表达与脑水肿的程度(用脑含水量表示)的关系,三组合并观察。左侧Apo-JmRNA表达与脑含水量之间呈正相关,r=0.948(p<0.001);随即进行回归,公式为:Y=a+bX,统计取得的回归方程为:Y=-2.468+0.038X(pa<0.001,pb<0.001);表现出了随脑含水量的增高及降低,Apo-JmRNA表达也增高或降低。而在右侧,Apo-JmRNA与脑含水量无相关(r=0.215,p>0.05);回归方程为:Y=-0.45+0.012X(pa>0.05,pb>0.05),故而直线回归不成立。
结论:
在实验性大鼠脑缺血再灌注侧脑组织Apo-JmRNA的表达增高,并与可以部分地代表脑损伤程度的脑水肿程度呈正相关。Apo-JmRNA的反应性浓度上调是对神经细胞的一种保护反应。