VEGF对人脑星形胶质瘤肿瘤干细胞定向迁移及增值的实验研究

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目的建立人脑星形胶质瘤肿瘤干细胞分离、培养并鉴定的方法;观察血管内皮生长因子VEGF对人脑星形胶质瘤肿瘤干细胞的定向迁移及增值的影响。方法采用CD133标记的磁珠分选法从人脑星形胶质瘤组织中分离出脑星形胶质瘤CD133+细胞,神经干细胞球无血清培养法进行分选后细胞培养,应用细胞免疫荧光染色对肿瘤球细胞及其分化细胞进行鉴定,并进行裸鼠体内荷瘤实验。免疫荧光染色检测血管内皮生长因子受体VEGFR在人脑星形胶质瘤肿瘤干细胞中的表达。免疫印迹法检测VEGF在人脑恶性星形胶质瘤与正常脑组织中的蛋白表达。Transwell转移模型评价VEGF对人脑星形胶质瘤肿瘤干细胞的迁移影响。CCK8法检测VEGF对人脑星形胶质瘤肿瘤干细胞增殖的影响。结果成功培养出人脑星形胶质瘤肿瘤细胞球,具有较强的单细胞克隆增殖能力,检测干细胞标记物CD133,Nestin阳性,分化后细胞表达神经元β-tubulinⅢ和星形胶质细胞GFAP特异性抗原,裸鼠体内荷瘤实验成功种植出肿瘤;免疫荧光组织化学法检测到人脑星形胶质瘤肿瘤干细胞VEGFR分选后表达明显多于分选前表达。免疫印迹法检测人脑恶性星形胶质瘤VEGF表达明显高于正常脑组织。Transwell体外细胞迁移实验发现,人脑星形胶质瘤肿瘤干细胞能顺VEGF浓度差定向迁移,且这一作用可被VEGF受体抑制剂所拮抗。VEGF能促进人脑星形胶质瘤肿瘤干细胞在无血清环境中的增殖。结论VEGFR在CD133阳性肿瘤细胞中高表达,VEGF在人脑恶性星形胶质瘤中较正常脑组织高表达,VEGF可能参与了人脑星形胶质瘤肿瘤干细胞定向迁移的过程并影响其增殖。
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