【摘 要】
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该文系统研究了Bt中的一类沉默基因——cry1I类基因;克隆了对鳞翅目害虫甜菜夜蛾有活性的cry1Ca和cry1Cb基因;深入研究了Cry1Ca蛋白的活性区;用定点诱变和Domain替换等方法分
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该文系统研究了Bt中的一类沉默基因——cry1I类基因;克隆了对鳞翅目害虫甜菜夜蛾有活性的cry1Ca和cry1Cb基因;深入研究了Cry1Ca蛋白的活性区;用定点诱变和Domain替换等方法分析了Cry1Ca蛋白结构与功能的关系;建立了Bt和E.Coli菌株中的cry基因表达系统.1.cry沉默基因的研究.首次系统地研究了142株Bt菌株的Cry1I-cry1类基因的连锁规律,根据cry1基因下游咻守区序列和cry1I基因上游保守区序列,设计了一对特异性通用引物S5una和S3una,PCR检验,其中71株出现阳性结果,说明了这种连锁普遍分布于Bt菌株.随后克隆了Btc007和J8菌株中的cry1I-cry1类基因的连锁序列,完成序列测定,在GenBank中登记,Accessionnumber分别为AF373208、AF373209.2.对甜菜夜蛾有活性的cry基因研究.从Bt菌株J8中克隆了一种cry1Ca基因,编码1189个氨基酸组成的蛋白质,分子量为134.7kDa,等电点为pH4.745,是弱酸性蛋白质.3.cry基因的定点诱变及Domain替换研究.4.cry基因在Bt菌株中的表达研究.用重叠引物PCR法,成功构建了Bt-E.coli穿梭的表达载体pSXY422b.该载体带有cry3Aa7基因不依赖芽孢形成的强启动子、STAB-SD序列及pET-21b的表达序列.
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