目的本研究基于"升降浮沉"药性理论指导下的用药规律,以蔓荆子和旋覆花为载体,验证升降浮沉药性对IPF大鼠血管新生的影响,此外,探讨细胞凋亡在血管新生中的核心作用,明确肺纤维化可能的发病机制。方法(1)文献综述:通过检索查阅中国知网、万方、维普等数据库中关键词为"升降浮沉"、"肺纤维化"、"细胞凋亡"、"血管新生"的临床报道,检索年限主要为2000-2018年,整理研究升降浮沉理论的应用,并对细胞凋亡、血管新生的作用及其在特发性肺纤维化过程中的意义进行系统整理分析。根据在肺纤维化疾病中,细胞凋亡与血管新生在肺纤维化疾病中所起到的作用,结合升降浮沉药性理论,观察蔓荆子、旋覆花对肺纤维化大鼠细胞凋亡和血管新生程度的影响,为应用中医药改善肺纤维化提供理论依据。(2)实验研究:实验采用SPF级Wistar大鼠,雄性,80只,体重在(190-220)g,随机分成5组,分为假手术组、模型组、蔓荆子组、旋覆花组、地塞米松组。除假手术组外,其余各组均采用博莱霉素气管滴入法建立大鼠肺纤维化模型。①病理组织作用研究:造模后第7 d、28 d取肺组织,HE染色后,在显微镜下观察大鼠肺组织呈现的病理形态,并对肺泡炎和肺纤维化程度分级打分,从病理角度进行定性;采用碱水解法检测新鲜肺组织内羟脯氨酸的表达含量,对肺纤维化程度进行定量。②细胞凋亡作用研究:造模后第7 d、28 d取肺泡灌洗液,提取肺泡巨噬细胞,流式细胞仪检测各组大鼠肺泡巨噬细胞凋亡率变化。③血管新生作用研究:造模后第7 d、28 d取大鼠肺泡灌洗液、大鼠血清、肺组织,ELISA法检测肺泡灌洗液中MCP-1、MIP-1α表达水平,ELISA法检测血清中bFGF和PF4表达水平。VIII相关抗原染色后测量肺组织微血管密度,HE染色后测量肺小动脉管壁厚度。结果(1)文献综述:升降浮沉理论是传统中医药理论的重要内容之一,巧妙利用中药升降浮沉药性来辨证治疗疾病,能更好的指导临床用药。中医认为,肺者,相傅之官,治节出焉,主气,司呼吸,主宣发与肃降。治疗肺系疾病须肺金升降协调,采用宣降并施,开合并举的方法。诸花皆升,旋覆花独降;诸子皆降,蔓荆子独升。二者均可入肺经,蔓荆子上行宣肺,旋覆花肃降肺气,化痰饮。结合蔓荆子与旋覆花的药性,并从细胞凋亡和血管新生角度梳理肺纤维化发病过程机制,升降浮沉的药性理论在肺系疾病中应用广泛。(2)实验研究:①病理组织作用研究在博来霉素诱导的IPF大鼠模型中,肺组织HE染色结果可见炎性浸润区域和病变的纤维化区域非常明显,依据肺泡炎、肺纤维化严重程度,进行分级打分,发现与假手术组比较,造模后各组均具有显著性差异(P<0.05),在给药7 d和28 d后,相比于模型组来看,蔓荆子组、旋覆花组具有显著性差异(P<0.05)。大鼠造模后,模型组HYP表达量升高,与假手术组比较具有显著性差异(P<0.01);7 d、28 d时各给药组肺组织中HYP表达含量均明显低于模型组,与模型组比较具有显著性差异(P<0.01)。造模7 d时,旋覆花组HYP表达含量高于地米组,与地米组比较具有显著性差异(P<0.01),蔓荆子组与地米组差异性无统计学意义;造模28 d时,蔓荆子组HYP表达含量高于地米组,与地米组比较有显著性差异(P<0.05),旋覆花组与地米组差异性无统计学意义。②细胞凋亡作用研究动物造模后,模型组大鼠AM凋亡率明显高于假手术组,且造模28 d时更明显,与假手术组比较具有显著性差异(P<0.01);7 d、28 d时各给药组大鼠AM凋亡率均明显低于模型组,与模型组比较有显著性差异(P<0.01);与造模7d时比较,28d时各给药组AM凋亡率均明显升高。③血管新生作用研究动物造模后,模型组大鼠MCP-1、MIP-1α表达水平均明显高于假手术组,与假手术组比较具有显著性差异(P.<0.01)。7d、28d时各给药组大鼠MCP-1、MIP-1α表达水平均明显低于模型组,与模型组比较有显著性差异(P<0.01)。7d、28d时蔓荆子组、旋覆花组MCP-1、MIP-1α表达水平均明显高于地米组,与地米组比较具有显著性差异(P<0.01)。从以上数据可以看出,在特发性肺纤维化的发病进程中,升浮药蔓荆子、沉降药旋覆花可以通过抑制趋化因子表达来改善疾病的发展。大鼠造模后,模型组bFGF表达量升高,与假手术组比较具有显著性差异(P<0.01);7 d、28 d时各给药组大鼠血清中bFGF表达量均明显低于模型组,与模型组比较均具有显著性差异(P<0.01);7 d、28 d时蔓荆子组、旋覆花组bFGF表达量均明显高于地米组,与地米组比较,具有显著性差异(P<0.01)。大鼠造模后,模型组PF4表达量明显低于假手术组,与假手术组比较具有显著性差异(P<0.01);7d、28d时各给药组大鼠血清中PF4表达量均明显高于模型组,与模型组比较均具有显著性差异(P<0.01)。7 d、28 d时蔓荆子组、旋覆花组PF4表达量均明显低于地米组,与地米组比较具有显著性差异(P<0.01)。大鼠造模后,与假手术组比较,模型组肺组织中MVD表达水平在7 d、28 d时均显著升高,具有显著性差异(P<0.01)。与模型组相比,蔓荆子组、旋覆花组、地塞米松组肺组织MVD在7d时表达明显降低,具有显著性差异(P<0.05);28d时蔓荆子组、旋覆花组、地塞米松组肺组织MVD表达水平均降低,但旋覆花组、地塞米松组降低更明显,与模型组相比具有显著性差异(P<0.05)。大鼠造模后,肺小动脉管壁厚度在7 d、28 d时均明显增厚,与假手术组相比,具有显著性差异(P<0.01),且28 d时较7 d时厚度增加更明显。给药7 d时,与模型组比较,蔓荆子组、旋覆花组对肺小动脉管壁增厚程度有明显的改善作用,具有显著性差异(P<0.05);给药28d时,与模型组比较,蔓荆子组、旋覆花组均可显著抑制IPF大鼠肺小动脉管壁增厚程度(P<0.01)。结论通过文献回顾得出,升降浮沉药性配合肺金升降出入,可改善肺纤维化症候,延缓疾病进程。并在特发性肺间质纤维化发病过程中,抑制细胞凋亡与血管新生对控制疾病进程起到关键作用。应用实验研究,在对各组大鼠病理组织的作用研究中,发现肺纤维化进程中羟脯氨酸表达水平升高,胶原蛋白合成和沉积增多。蔓荆子、旋覆花在7 d肺泡炎时期和28 d肺纤维化时期均可不同程度地抑制肺组织羟脯氨酸含量表达水平,从而干预肺纤维化,但二者作用靶点有差异,其中升浮药蔓荆子主要作用于肺泡炎阶段,而沉降药旋覆花主要作用于纤维化阶段;发现在对细胞凋亡作用的研究中,蔓荆子、旋覆花均能抑制细胞凋亡,且7d时蔓荆子抑制凋亡作用较旋覆花更明显;28 d时,旋覆花抑制AM凋亡作用比蔓荆子更明显,表明升浮药与沉降药影响肺纤维化具有时效性;发现在对血管新生的作用研究中,蔓荆子、旋覆花均能改善趋化因子MCP-1、MIP-1α表达水平,通过抑制趋化因子的表达来抑制炎性细胞分泌聚集,进而抑制肺泡炎发展。蔓荆子、旋覆花在肺泡炎阶段和肺纤维化阶段均可抑制bFGF表达,促进PF4表达,从而抑制血管新生过度,且在肺纤维化阶段抑制作用更明显;同时二者均能不同程度地降低微血管密度,抑制肺小动脉管壁厚度增加。由于二者药性不同,一升一降,在肺泡炎阶段和肺纤维化阶段作用具有差异性,其中升浮药蔓荆子主要作用于早期肺泡炎阶段,而沉降药旋覆花主要作用于后期肺纤维化阶段。本研究发现蔓荆子、旋覆花均可以改善血管过度新生,证实了升降浮沉药性对血管新生的作用影响。药性不同,作用时间不同,进而引起血管新生程度不同。此外,发现AM凋亡在血管新生中占据核心地位,细胞凋亡启动在先,凋亡的肺泡巨噬细胞可使大量趋化因子分泌聚集,导致细胞因子紊乱,进而引起血管新生。因此,肺纤维化的发病机制主要是前期细胞凋亡过度以及整个疾病过程中血管新生过量,导致炎性细胞聚集,发展成肺纤维化。使用升降浮沉药可通过抑制AM凋亡和血管新生因子的分泌,延缓纤维化进程。推广升降浮沉药性理论改善肺纤维化有助于更科学的指导临床用药。