两面针内生活性菌株Y118的初步研究

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目的:由于植物内生真菌与宿主植物特殊的生存关系,使其能够产生与宿主植物相同或形似的化学成分。本课题以广西产两面针Zanthoxylum nitidum(Rox.)DC.原植物分离出的活性内生菌株Y118为研究对象,并对其次生代谢产物的生物活性进行研究。旨在为药用植物两面针的资源保护与开发提供实验依据。  方法:通过形态学和分子生物学方法对Y118菌株进行鉴定;通过单因素考察来研究各条件对菌株发酵的影响;采用提取法获得Y118菌株次生代谢的粗提物,并通过抑菌圈法和3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT法)研究其抗菌抗肿瘤作用,同时利用硅胶柱色谱,大孔树脂吸附色谱,葡聚糖凝胶色谱,重结晶等分离方法对其次生代谢的粗提物的活性部位进行分离和纯化,并通过质谱,氢谱和碳谱等波谱技术解析化合物结构。  结果:经鉴定,菌株Y118可能为半知菌亚门拟茎点霉属真菌;以发酵菌丝干重为考察对象,结果表明燕麦片为碳源,牛肉膏为氮源,PH=7,温度25℃、培养时间7天、接种量10块/瓶、装液量250ml/瓶、摇床转速120r/min时,菌丝干重数值最大。菌株发酵代谢产物的提取物和发酵液,均对病原菌有不同的抑制作用,其中以发酵液的抑菌作用最明显且广谱。当浓度为80ug/ml时,Y118菌株的发酵代谢产物的甲醇提取物,丙酮提取物和乙酸乙酯提取物均对肝癌HepG2细胞有抑制作用;菌株的发酵液对肝癌HepG2细胞具明显的抑制作用。从菌株发酵代谢产物的提取物的活性部位和发酵液中分离出15个单体化合物。初步鉴定出主要为:麦角甾醇,景天庚酮糖衍生物,硬脂酸类和其他类化合物。  结论:以上研究表明,Y118菌株及其次生代谢产物对参试病原菌和肝癌细胞均有一定的抑制作用,同时其次生代谢产物成分丰富具有较大的开发前景,因此,本研究为药用植物两面针的资源保护与开发提供可靠的实验参考依据。  
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