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大黄鱼((Pseudosciaena crocea)是我国海水传统养殖中最重要的经济养殖鱼类之一。细胞色素P450(Cytochrome P450)是细胞色素P450单加氧酶系的最重要组分之一,参与催化生物对内源物质和亲脂性外源化合物的代谢过程。
本研究是在本实验室构建的大黄鱼消减杂交cDNA文库中长623 bp的EST序列基础上设计引物,以腹腔注射LPS的大黄鱼肝脏mRNA为模板,采用RACE-PCR.的方法,克隆、鉴定出细胞色素P450 CYP4F7基因cDNA全长序列。结果显示:大黄鱼CYP4F7cDNA全长1934bp,5端非编码区59 bp,3端非编码区264 bp,开放式阅读框1611 bp,编码含有536个氨基酸残基的蛋白,推测的蛋白质分子量为61.6 Kda。序列分析表明大黄鱼的CYP4F7的氨基酸序列与舌齿鲈的同源性最高,达91%;与人CYP4F2的同源性为68%,与小鼠CYP4F4和家鼠CYP4F6分别为71%和67%。
采用RT-PCR方法研究了CYP4F7基因在对照组大黄鱼、注射了溶藻弧菌灭活疫苗组大黄鱼和注射了细菌脂多糖LPS(Lipopolysaccharide)的大黄鱼各组织中的表达情况。结果发现:CYP4F7在各处理组大黄鱼的脾、肝、心、头肾、肾、鳃中均有表达,脾、肝组织中的表达水平高于头肾、心、肾和鳃。在对照组和溶藻弧菌灭活疫苗组大黄鱼的肌肉和肠组织中CYP4F7均有少量表达,而在LPS刺激组中未见表达。CYP4F7在LPS刺激组中的表达量均显著低于对照组,而溶藻弧菌灭活疫苗组刺激组则明显高于对照组。采用RQ-PCR相对定量方法分析该基因在对照组和溶藻弧菌灭活疫苗刺激组织中的表达情况,所得结果同RT-PCR一致。
上述结果说明:我们已经首次成功克隆鉴定了大黄鱼细胞色素P450CYP4F7基因。溶藻弧菌灭活疫苗的刺激增强了CYP4F7在大黄鱼各组织中的表达;而CYP4F7在注射了LPS的大黄鱼各组织中的表达量均低于正常的大黄鱼各组织中CYP4F7的表达量。因此,溶藻弧菌福尔马林灭活疫苗可能是CYP4F7表达的诱导剂,而LPS可能是CYP4F7表达的抑制剂。