猪增生性肠炎诊断方法的研究

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增生性肠炎病(Porcine Proliferative Enteropenthy,PPE)是由胞内劳森氏菌(Lawsonia Intracellaris,LI)引起猪的常见接触性肠道传染病。PPE多发生于6-20周龄的断奶仔猪,主要表现为坏死性回肠炎、猪肠腺瘤样病、局部性回肠炎和增生性出血性肠炎等病症,给我国的养猪业造成巨大的经济损失。因此,对该病进行科学的防控就显得十分必要和迫切。针对目前PPE流行特点,本研究对临床症状及病理切片进行了观察及建立了在活体粪便中LI的PCR特异性检测方法。该PCR检测方法具有检测时间短、灵敏度高等特点。为早期检测病原菌的感染情况提供了良好的诊断方法,在预防和控制PPE暴发和流行方面具有重要的意义。研究内容及结果如下:1.猪增生性肠炎临床症状及病理组织学观察。本研究对发病猪进行临床症状观察,对病猪剖检,取病变肠段通过H.E和Ziehl-Neelsen氏抗酸切片染色及姬姆萨氏和革兰氏涂片染色方法进行病理组织学检查。结果显示临床症状主要表现为贫血、消瘦,急性病例则突然死亡;剖检可见最显著特征是粘膜形成脑回样皱褶,慢性PE的剖检表现为回肠壁增厚、肠管直径增加;坏死性PE则肠粘膜增厚,粘膜上形成凝固性坏死灶,急性出血性PE肠腔内含有血块;病理组织学观察可见肠腺窝上皮细胞增生。用上述染色方法染色后镜检分别可见被染成深黑色、红色、浅蓝色和红色的不同弯杆状胞内劳森菌。该方法可作为确诊本病的辅助手段。2.本研究在国内首次建立PPE的活体粪便病原菌PCR诊断方法。根据Genbank上猪胞内劳森氏菌16S基因序列,设计一对特异性引物,并优化了各种PCR反应条件,且对特异性和敏感性进行了测定,结果表明能扩增出与试验设计相符的210bp特异性条带,同时具有较高的灵敏度,临床阳性样品提取的核酸浓度为263ng/μl稀释25倍后仍可检测出含量约为1.0ng的LI。所建立的PCR诊断方法能够快速准确的对LI进行早期监测,从而为预防本病提供了切实可行的技术手段。
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