免疫生长激素受体(GHR)胞外区N端小分子片段对鸡生长的影响和分子机理研究

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为了探讨通过与生长激素受体(GHR)胞外区(ECD)特异结合的抗体能否激活或抑制生长激素受体的信号传导,从而调节动物的生长。本文首先通过基因工程途径制备了鸡GHR N端120个氨基酸残基的GHR ECD重组蛋白,并以此蛋白作为抗原,制备疫苗免疫生长鸡60只,然后观察对鸡采食、生长和胴体组成等各方面的影响。在70天的试验中,试验组经过4次相隔20天左右的肌肉注射2或1ml(高、低剂量组,n=20)GHR ECD抗原(以1mg/ml溶于矿物油佐剂),对照组(n=20)同时注射1ml含KLH的抗原(以1mg/ml溶于矿物油佐剂)。实验期间,每隔10天左右对所有鸡进行称重和测定采食量,并翅静脉采血以测定抗体效价水平。实验第70天时,高、低剂量组和对照组各随机选取10只鸡进行屠宰测定,并将三个组中剩余的30只鸡采取肝脏、胸肌和垂体等样品,用于生长调控相关基因的表达检测以及生长调节信号通路中的相关蛋白的表达检测。  实验结果显示:高、低剂量组血液中抗GHR抗体水平在免疫后即显著(P<0.01)上升,并在试验期间极显著(P<0.01)的高于对照组的非特异水平,但在高、低剂量组之间并无差异。免疫GHR ECD也显著抑制了鸡的生长(P<0.01),使低剂量组鸡在首免后30天体重就已经显著低于对照组(P<0.05)鸡,高剂量组鸡在首免后30天体重极显著低于对照组(P<0.01),并持续至试验结束。在增重受抑制后,免疫GHR鸡在后期的采食量也显著(P<0.05)降低。屠宰时对照组的体重、屠宰率、半净膛率、全净膛率和腹脂率都高于两免疫组,而高剂量组的胸肌率和腿肌率则显著(P<0.05)高于对照组。  对所采样品进行实时荧光定量PCR分析的结果也显示,处理组中肝脏组织的类胰岛素样生长因子(IGF-1)基因表达量低于对照组,胸肌IGF-1、GHR基因表达量高于对照组。另外对肝脏样品进行蛋白印迹(western blot)分析,也得出处理组中肝脏磷酸化蛋白Jak2的表达量低于对照组的p-Jak2蛋白表达量(P>0.05)。与此同时,因为受到机体内的负反馈机制影响,垂体中GH基因的表达量高于对照组的表达量,但这种差异性并不显著(P>0.05)。  以上实验的数据说明,对鸡免疫GHR ECD所产生的抗GHR抗体将显著抑制鸡的生长,这一机制可以通过抑制生长激素受体信号传导和IGF-I的合成来实现,即是通过免疫GHR ECD来封闭GH的作用,从而达到抑制动物生长的效果。这一方法有可能被应用于其他需要限制动物生长如后备种鸡的培育方面或者是小型动物的培育方面。  
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