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DNA 疫苗又称核酸疫苗,作为一种新型疫苗,DNA疫苗与传统疫苗相比有着明显的优势,如易于生产,稳定性强,成本低廉等,并可同时诱导体液免疫和细胞免疫,但DNA疫苗的免疫效果在不同动物个体中差异较大,有些疫苗在小个体的动物中免疫和保护效果较好,而在大个体动物中效果较差,尤其是在大型动物和人类中,影响了它的实际应用。如何增强DNA疫苗的免疫反应成为当前研究的热点和难点。 我们以HBV DNA疫苗作为模型抗原,选择结核分支杆菌的热休克蛋白65、金黄色葡萄球菌肠毒素A和人胸腺素α原基因作为HBV DNA疫苗的佐剂,进行DNA疫苗免疫佐剂的研究。 本研究克隆了HBV的preS2S基因、结核分支杆菌的热休克蛋白65、金黄色葡萄球菌肠毒素A和人胸腺素α原基因,构建了三种单独表达的佐剂质粒:pHSP65、pmSEA、pThyα;三种融合表达的佐剂-抗原质粒:pHSP65/HBVs2s、pmSEA/HBVs2s、pThyα/HBVs2s;以及单独的模型抗原质粒pHBVs2s。体外瞬时转染293细胞或P815细胞,除外pmSEA/HBVs2s,Western Blot均检测到目的蛋白的表达,ELISA实验证实了转染细胞表达的HBsAg与相应的抗HBsAg抗体能产生良好的免疫反应,说明表达的重组抗原具有抗原性。 DNA疫苗与其佐剂免疫小鼠。ELISA结果显示三种佐剂均可增强pHBVs2s免疫小鼠抗HBs的产生,与单独pHBVs2s免疫组相比,提高了抗HBs抗体滴度。激发抗HBs抗体滴度的高低顺序依次是pHBVs2s+pThy α、pHBVs2s+pmSEA、pHBVs2s+pHSP65、pHBVs2s。ELISPOT检测分泌IFN-γ的脾淋巴细胞数量高低顺序依次是pHBVs2s+pmSEA、pHBVs2s+pThyα、pHBVs2s+pHSP65、pHBVs2s。HBsAg特异性CTLs的杀伤活性高低顺序分泌IFN-γ的脾淋巴细胞数量高低相一致。两种融合基因组小鼠也激发了抗HBs,其抗HBs抗体滴度的高低顺序依次是pThyα/HBVs2s和pHSP65/HBVs2s,pmSEA/HBVs2s未能诱导小鼠产生抗HBs抗体。HBsAg IgG亚类的分析发现:pThyα、pmSEA和pHSP65明显提高IgG2a,促进Th0向Th1分化。