进行特异设计引物后,对牛白介素18(IL-18)基因进行了RT-PCR克隆,将克隆产物至pMD18-T载体上,筛选阳性重组质粒,测序。结果表明:克隆到的牛IL-18序列与非洲水牛IL-18核苷酸序列及其推导氨基酸序列同源性分别是99.5%和99%。为研究牛IL-18的结构及生物学功能,新型疫苗佐剂开发奠定了基础。利用大肠杆菌原核表达系统,对O型FMDV多表位免疫原基因重组体mVP1进行了表达,表达的目的蛋白以包涵体的形式存在,用尿素梯度法对包涵体进行洗涤,最后用切胶的方法对经洗涤过的包涵体进行了粗步纯化。表达的蛋白占菌体总蛋白的18%。Western Blot检测证实其可被抗O型FMDV多抗识别,可用于FMDV血清检测。应用生物信息学和分子设计理论,人工合成的O型FMDV多表位免疫原基因重组体mVP1克隆至真核表达载体pVAX1上,构建DNA疫苗pVAX1-mVP1。辅以超抗原SEA和牛IL-18构建了含内原性佐剂DNA疫苗pVAX1-SEA-mVP1和pIRES-IL18-mVP1。将构建的DNA疫苗与两种化学佐剂混合后分别单独免疫BalB/C小鼠和联合免疫BalB/C小鼠,并对其诱导的体液和细胞免疫水平进行了检测。结果表明,上述3种DNA疫苗均能诱导免疫动物产生特异性的体液免疫及细胞免疫应答。其中以化学佐剂2与pIRES-IL18-mVP1组免疫效果最佳。本研究结果为新型疫苗研发提供了新思路。