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硫氧还蛋白（Thioredoxin,Trx）是一类小分子多功能蛋白,广泛存在于原核和真核生物中,它们属进化保守的氧化还原蛋白家族,具有一个相同的-Cys-Gly-Pro-Cys-的氧化还原活性中心。Trx-1又称成人型T细胞性白血病衍生因子、类白细胞介素1细胞因子、早孕因子,是硫氧还蛋白家族中研究最广泛的成员。Trx-1与硫氧还蛋白还原酶（Thioredoxin reductase 1,Trx R1）和NADPH共同构成一个重要的氧化还原调节系统（Trx系统）,对细胞抵御氧化应激和维持细胞内正常的氧化-还原平衡具有重要的作用。此外,Trx-1也能作为促生长因子、转录因子激活剂、辅助因子及多种酶的受体影响着细胞内环境及相应生理活动。近年来,许多研究显示Trx-1和肿瘤的关系非常密切,它可以调节肿瘤细胞中凋亡通路、转录因子和某些功能蛋白酶的活性,进而影响着肿瘤的发生、发展、增殖、凋亡及血管发生等生理过程。而且,过量表达的Trx-1导致肿瘤细胞对多种治疗药物产生耐药性。Trx-1已经成为国际上肿瘤分子生物学研究中的热点,是一个极具临床意义的肿瘤治疗的新靶点。多项研究显示,对Trx-1进行翻译后修饰,如羟基氧化、S亚硝基化或谷胱甘肽化,将对其功能产生明显而重要的影响,而对Trx-1的磷酸化研究却未见报道。在2005年,对人肝癌细胞系HepG2的磷酸化蛋白组学研究中,首次发现Trx-1第100位苏氨酸（Thr）可磷酸化。为研究磷酸化修饰对Trx-1功能的影响,我们进行了以下工作:利用PT-PCR技术,从肝癌细胞系HepG2中得到Trx-1基因,构建了原核表达载体pET32a-Trx,通过E.coli系统高效表达和Ni-NTA纯化,得到预期融合蛋白His-Trx-1。使用杂交瘤技术成功制备了三株抗Trx-1单克隆抗体,均为IgG1（κ）亚型,其效价均达1:10000,特异性高,为后期通过Elisa及Western Blot方法研究该蛋白功能提供了有力工具。应用分子生物学技术,将Trx-1 DNA序列的第299位A突变为C,即将其氨基酸序列的第100位苏氨酸（Thr,T）突变为天冬酰胺（Asn,N）,构建了两种真核表达载体pcDNA-Trx和pcDNA-muTrx,并分别建立了稳定表达Trx-1和muTrx-1的HepG2细胞系。用不同抗癌药刺激转染细胞,发现转染muTrx-1的细胞对药物的敏感性增强了,更容易发生凋亡。同时发现muTr-1分子结合ASK-1（凋亡信号激酶1）的能力下降了。这表明Trx蛋白分子100位的“T”的磷酸化有利于其发挥抗凋亡的生物活性,其可能的机制是T-100的磷酸化有助于Trx-1和ASK-1的结合。这对于开发针对Trx磷酸化的抗肿瘤药物提供了新的思路。随着炎-癌链概念的提出,Trx-1也开始因其在各种炎症或应激疾病以及在炎症通路中的作用而受到关注。而一种新的多功能炎性蛋白DT/AIF-1被发现于Ⅰ型糖尿病自身免疫反应的胰腺炎组织和慢性移植排斥反应的同种大鼠异体移植的心脏中,能促进多种炎症细胞,包括巨噬细胞、淋巴细胞和单核细胞的增殖、迁移和分泌。为探讨Trx-1与DT/AIF-1的相互调节关系,我们进行了如下研究:将重组质粒pcDNA-AIF-1转染人单核白血病细胞株U937,与对照组相比,发现DT/AIF-1水平的升高,但并不影响细胞内Trx-1的水平。而外源添加DT/AIF-1却能显著提高胞内Trx-1水平。将两个重组质粒pcDNA-Trx和pcDNA-NLS-Trx分别转染人细胞株U937,均能显著提高细胞内DT/AIF-1的蛋白水平及细胞的DT/AIF-1的分泌;同时发现,胞质中Trx-1对DT/AIF-1的转录水平没有影响,而细胞核内的Trx-1则可以使DT/AIF-1的mRNA水平显著提高。这说明不同的亚细胞定位的Trx-1对DT/AIF-1的调控方式是有差异的:胞质中的Trx-1在翻译水平正调控DT/AIF-1,而Trx-1入核后在转录水平对DT/AIF-1进行正调控。以上研究结果表明,细胞内的Trx-1促进了DT/AIF-1的表达和分泌,而分泌到细胞外的DT/AIF-1则反过来促进了Trx在细胞内的表达。因此本文提出了Trx-1和DT/AIF-1的调控是互动模式的。上述结果有利于进一步深入研究DT/AIF-1在心血管疾病的形成和器官移植中炎症发生的机理。