目的:恶性淋巴瘤(Malignant Lymphoma,ML)是一种起源于淋巴造血组织的实体瘤。在我国,恶性淋巴瘤虽然相对少见,但近年来年新发病例数逐年上升。国内、外对于淋巴瘤的研究已有百余年历史。现代医学在治疗淋巴瘤方面已经取得一定疗效,但预后仍较差。中医历代文献中虽然没有恶性淋巴瘤这一病名,但就其临床症状和体征看,当属中医“瘰疬”、“失荣”、“石疽”、“恶核”、“痰核”等病范畴。对此,历代文献记载有不少宝贵的治疗经验,值得借鉴。导师刘亚娴教授参考历代文献(如:《医学心悟》、《医学衷中参西录》、《伤寒温疫条辨》等),并考虑到淋巴瘤的临床表现和发病特点,结合临床治疗体会,组成方剂瘰消饮。经过多年临床实践证明,对于恶性淋巴瘤患者,瘰消饮可明显改善其临床症状,提高生活质量,延长生存期,并在放、化疗间歇期对预防淋巴瘤的复发和转移有显著疗效。对不宜、不能放、化疗的患者,以及晚期患者的治疗也有一定的疗效。有的患者甚至可较长期的带瘤生存。在临床运用取得疗效的基础上,我们进行本实验研究,目的在于探讨瘰消饮方剂在诱导恶性淋巴瘤细胞凋亡方面的作用机理,为该方治疗恶性淋巴瘤提供客观依据,进一步指导和扩大临床应用。方法:应用体外细胞培养技术,在查阅文献资料的基础上并经预实验选取0.5mg/ml、1.0mg/ml、2.0mg/ml、4.0mg/ml、8.0mg/ml五个终浓度,同时设RPMI-1640为空白对照组,与肿瘤细胞共同培养24、48、72小时后,以苔盼蓝拒染法检测瘰消饮水溶液对肿瘤细胞体外作用后的细胞存活率;采用四氮唑盐(MTT)法检测瘰消饮对淋巴瘤细胞Raji的增殖抑制作用;流式细胞术检测不同浓度瘰消饮水溶液对肿瘤细胞作用后细胞的凋亡率及对细胞周期分布的影响;并且用流式细胞术检测不同浓度瘰消饮作用肿瘤细胞后,对凋亡抑制基因bcl-2蛋白表达的影响。结果:1苔盼蓝拒染法结果显示1.0mg/ml、2.0mg/ml、4.0mg/ml、8.0mg/ml浓度组瘰消饮分别作用于Raji细胞24、48、72小时后,细胞生长均明显受到抑制,与对照组相比有明显差异(P<0.05),在该浓度范围内呈现剂量-时间依赖性。但0.5mg/ml浓度组与对照组相比没有差异(P>0.05)。各中药浓度组组间两两比较差异明显(P<0.05)。2 MTT比色法检测结果显示瘰消饮水溶液作用Raji细胞24、48、72小时后,1.0mg/ml、2.0mg/ml、4.0mg/ml、8.0mg/ml浓度组均能够抑制肿瘤细胞增殖,与对照组相比有明显差异(P<0.05),且增殖抑制率与药物作用浓度和时间呈正相关,呈现剂量-时间依赖性。但0.5mg/ml浓度组与对照组相比没有明显差异(P>0.05)。3流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡率结果显示经过1.0mg/ml、2.0mg/ml、4.0mg/ml、8.0mg/ml浓度瘰消饮作用Raji细胞72小时后,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,与对照组相比有显著性差异(P<0.01);而0.5mg/ml浓度组虽然也使G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,但与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。经过2.0mg/ml、4.0mg/ml、8.0mg/ml浓度瘰消饮作用肿瘤Raji细胞72小时后,细胞凋亡率增高,与对照组相比有明显差异(P<0.05)。0.5mg/ml、1.0mg/ml药物组作用肿瘤细胞72小时后凋亡率与对照组相比没有显著差异(P>0.05)。4流式细胞术检测bcl-2蛋白表达结果显示随着中药作用浓度的增加bcl-2蛋白表达率明显降低,1.0mg/ml、2.0mg/ml、4.0mg/ml、8.0mg/ml浓度组与对照组相比有显著性差异(P<0.01)。0.5mg/ml浓度组与对照组相比没有明显差异(P>0.05)。各中药浓度组组间比较均有显著差异(P<0.01)。结论:通过细胞体外培养实验结果可以发现,瘰消饮方在一定浓度范围内具有明显抑制恶性淋巴瘤Raji细胞增殖的作用,并呈浓度和时间依赖性。瘰消饮能够影响细胞周期分布,引起G0/G1期阻滞,诱导肿瘤细胞凋亡。瘰消饮的这些作用可能与其下调bcl-2蛋白表达率有关。