系统性红斑狼疮活动期及治疗中微小RNA的筛选研究

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系统性红斑狼疮(SLE)是一种较常见的反复发作累及多器官系统的自身免疫性疾病,其发病机制至今仍未阐明。微小RNA(microRNA,miRNA)是一类新发现的内源性非编码小RNA,通常在转录后水平调控mRNA表达,有着十分广泛而重要的生理功能,已证实其参与多种疾病发生。本研究从miRNA角度出发,用miRNA芯片分别筛选SLE患者外周血单核细胞和狼疮性肾炎患者肾组织皮质的miRNA差异表达,以确定miRNA与SLE的关联。第一部分芯片筛选SLE患者外周血单核细胞microRNA的差异表达目的筛选系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单核细胞(PBMC)差异表达的microRNA (miRNA),为进一步探讨SLE发病的分子生物学机制提供平台。方法提取23名SLE患者、10名特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者及年龄配对的10名健康对照者PBMC中总RNA并分离miRNA,采用含1152条探针的哺乳动物miRNA芯片对三组之间差异表达的miRNA进行分析。选择其中4个miRNA,应用Northern blot对芯片结果进行验证。结果SLE与正常对照PBMC间差异表达的miRNA共16个,其中9个表达上调,7个表达下调。Northern blot验证结果与芯片表达结果一致。结论SLE患者PBMC中差异表达的miRNA可能参与了SLE的发病机制,是潜在的SLE诊断标志物。第二部分狼疮性肾炎患者肾皮质中差异表达的microRNA的筛选目的通过microRNA芯片技术分析microRNA在狼疮性肾炎(lupus nephritis, LN)中的差异表达。方法以3例正常的肾组织皮质作为对照组,5例狼疮性肾炎患者肾穿组织皮质作为实验组,采用microRNA芯片与荧光定量PCR技术研究狼疮性肾炎患者肾组织中microRNA的差异表达。结果狼疮性肾炎肾组织中出现差异表达的microRNA有66个,其中显著表达上调36个,显著表达下调30个。选hsa-miR-657,hsa-miR-615进行相对定量研究。狼疮性肾炎组中hsa-miR-657基因表达量是对照组的1.558倍,hsa-miR-615基因表达量是对照组的0.346倍。结论microRNA在狼疮性肾炎患者肾皮质中出现显著差异表达,深入研究microRNA在狼疮性肾炎中的作用机制将为狼疮性肾炎的诊断,治疗和预防及其分子机理研究提供新的思路和途径。
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