2-苯乙醇是一种具有玫瑰花香的芳香醇,广泛应用于食品、化妆品和医药行业。利用酵母生物转化生产天然2-苯乙醇具有重要的应用价值,然而2-苯乙醇对酵母生长的抑制作用是生物法合成2-苯乙醇的瓶颈之一,所以采用遗传育种技术改良菌种来提高酵母对2-苯乙醇的耐受性有望提高2-苯乙醇的产量。本文对酵母S.cerevisiae CWY132进行紫外诱变育种,获得了 2株2-苯乙醇高耐受性菌株UV-1和UV-2,产量分别为3.62和3.74g/L,较原始菌株分别提高了 7.74%和11.3%。全局转录工程技术(gTME)是利用易错PCR和DNA重排等技术对全局转录因子进行改组修饰,使得整个基因组的转录发生全局性改变,从而导致由多基因控制的细胞表型得到改变,最终获得需要的优良表型。本文研究了全局转录因子SPT15的定向进化对酵母细胞2-苯乙醇耐性的影响。首先将酿酒酵母中编码TATA-结合蛋白的SPT15基因进行易错PCR随机突变,然后将易错PCR产物连接至表达载体pESC-TRP,并构建突变体文库,再用醋酸锂法转化宿主酵母S.cerevisiae WHU2a。通过在高浓度2-苯乙醇中培养筛选的方法,筛选出2-苯乙醇耐性明显提高的酵母突变株PST1。突变株PST1在3.2 g/L 2-苯乙醇液体培养条件下的生长状况明显优于对照菌株,40 h的OD600值约为对照菌株的1.6倍,其2-苯乙醇产量比对照菌株提高了32.28%。对突变株PST1的SPT15氨基酸序列分析表明,分别有两处2处氨基酸残基发生了突变,分别为:Ser176 Arg、Leu203 His,推测可能与2-苯乙醇的耐性提高有关。由此表明,SPT15是对酿酒酵母2-苯乙醇耐性进行改造的一个重要的全局转录因子。