【摘 要】
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目的:探讨低剂量壬基酚(Nonylphenol,NP)对结肠癌SW480细胞的增殖作用以及是否通过G蛋白偶联受体30(G protein-coupled estrogen receptor 30,GPR30)介导了相关的效应。方法:1.利用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测不同浓度NP在体外水平对人结肠癌SW480细胞增殖作用的影响及最佳实验浓度。2.流式细胞技术检测雌二醇
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目的:探讨低剂量壬基酚(Nonylphenol,NP)对结肠癌SW480细胞的增殖作用以及是否通过G蛋白偶联受体30(G protein-coupled estrogen receptor 30,GPR30)介导了相关的效应。方法:1.利用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测不同浓度NP在体外水平对人结肠癌SW480细胞增殖作用的影响及最佳实验浓度。2.流式细胞技术检测雌二醇(Estradiol,E2)、NP、GPR30抑制剂G15+NP分别处理SW480细胞后细胞周期及凋亡的变化。3.免疫荧光技术检测E2、NP作用于人结肠癌SW480细胞后GPR30的表达。4.免疫蛋白印迹法(Western-Blot)检测E2、NP、NP+G15分别作用人结肠癌SW480细胞后GPR30蛋白的表达变化。5.实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)技术检测E2、NP、NP+G15分别作用人结肠癌SW480细胞后GPR30 mRNA的表达变化。结果:低剂量NP对SW480细胞起促进增殖的作用,与空白对照组和E2对照组相比,低剂量NP组细胞活力增加,低剂量NP促进了SW480细胞的增殖,同NP组相比较,NP+G15组的细胞活力明显下降;与空白对照组和E2对照组相比,低剂量NP组细胞进入S期细胞的比例增加,同NP组相比,NP+G15组中进入S期的比例降低;与空白对照组和E2对照组相比,低剂量NP组细胞的凋亡率明显下降,同时与NP组相比较,NP+G15组中SW480细胞的凋亡率增加;免疫荧光实验显示,与空白对照组、E2对照组相比,低剂量NP处理SW480细胞后GPR30蛋白表达增高;Western-Blot实验显示,与空白对照组、E2对照组相比,低剂量NP处理组中GPR30蛋白表达增高,同时与NP组相比,NP+G15处理组GPR30蛋白表达降低;RT-PCR实验结果显示,与空白对照组、E2对照组相比,低剂量NP处理组细胞中GPR30 mRNA表达增高,与NP组相比,NP+G15处理组中GPR30 mRNA的表达下降。结论:低剂量NP可能通过上调GPR30的表达,从而促进了人结肠癌SW480细胞的增殖效应。
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