日本血吸虫蛋白Sj22的克隆表达及诊断应用研究

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本论文旨在寻找一种能够辅助诊断日本血吸虫病的抗原蛋白,同时制备其抗体,为研制日本血吸虫免疫诊断试剂盒、进一步开展该蛋白的深入研究奠定基础,并在抗体制备过程中探讨提高基因免疫效果的策略方法。我们克隆了日本血吸虫myophilin样蛋白(Sj22,Genebank号AY223463)的编码基因,重组入质粒pET22b后,在大肠杆菌BL21内表达并纯化获得一大小约25KDa的重组融合蛋白质rSj22。以rSj22作为诊断抗原用于血吸虫抗体的ELISA检测,在动物实验中检测特异性为100%,并且检测感染血吸虫的兔血清中抗Sj22抗体水平变化可反映兔感染和治疗状况。用于现症血吸虫病人血清中的抗体检测时,rSj22检测的特异性和敏感性分别为93.9%和57.4%。 另外,我们利用基因免疫的方法制备了Sj22蛋白的抗体,采用肌肉注射的方法免疫小鼠,实验动物分为四组:A组注射pVAX1-sj22质粒100μg /只;B组注射pVAX1-sj22质粒50μg /只,同时注射CpG佐剂20μg /只;C、D组注射pcDNA3.1-sj22质粒100μg /只。分别在0,3,6周进行免疫,第9周A、B、C组用30μg重组sj22蛋白加强免疫,D组仍用pcDNA3.1-sj22质粒100μg加强免疫。第0,9,10周割尾采血,使用ELISA方法进行抗体效价测定,Western blot验证抗体的特异性。结果表明:使用基因免疫的方法获得了针对Sj22的特异性抗血清,CpG佐剂能够有效降低质粒用量,基因免疫-蛋白加强的策略使得抗体的滴度提高了40~1280倍。另外,我们以基因免疫得到的抗血清为探针,利用免疫荧光定位的方法,定位Sj22蛋白于日本血吸虫成虫的表皮。
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