论文部分内容阅读
目的：乙酰化修饰是蛋白质翻译后修饰（post-translationalmodification, PTM）的重要方式之一，可发生在组蛋白和多种炎症相关转录因子，是调控炎症相关基因表达的重要机制。乙酰化修饰是可逆的，乙酰化和去乙酰化修饰分别由组蛋白乙酰转移酶（histoneacetyltransferases, HATs）和组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylases,HDACs）所催化。目前关于HDACs抑制剂对炎症的调节效应已有较多研究，但HATs抑制剂是否也可影响炎症的发生发展却少有报道。Garcinol是常用的HATs抑制剂，本文在脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）/右旋半乳糖胺（D-galactosamine, D-Gal）诱导的小鼠急性肝损伤模型中观察了garcinol对肝损伤的调节效应并初步探讨了其可能的机制。方法：雄性BALB/c小鼠腹腔注射LPS（10μg/kg）及D-Gal（700mg/kg）诱导急性爆发性肝损伤，溶剂或不同剂量garcinol（2.5mg/kg，5mg/kg，10mg/kg）在LPS/D-Gal处理前0.5h经腹腔注入。LPS/D-Gal处理后1.5h，小鼠经麻醉后断颈处死，采集血浆及肝组织样本，ELISA法检测各样本中TNF-α和IL-6的水平。另一批小鼠在LPS/D-Gal处理后6h处死并采集血浆及肝组织样本。采用化学显色法检测血浆中转氨酶ALT和AST水平、测肝组织中丙二醛（malondialdehyde, MDA）含量及caspase-3，-8，-9活性；免疫印迹法检测肝组织中p65，乙酰化p65，p53，乙酰化p53，激活型caspase-3，Bax及Bcl-2蛋白含量；肝组织经福尔马林固定后，常规HE染色观察组织病理学改变，TUNEL法检测细胞凋亡，免疫组织化学法检测激活型caspase-3水平。结果：研究发现HATs抑制剂garcinol可明显减轻LPS/D-Gal诱导的肝损伤，garcinol对模型小鼠肝内炎症反应无明显影响但可显著抑制肝细胞凋亡。具体表现在：（1）Garcinol在2.5～10mg/kg范围内能剂量依赖性抑制LPS/D-Gal诱导的血浆中ALT和AST的升高，这一效应伴随有模型小鼠肝组织内MDA水平的降低及组织病理损伤的减轻；（2）LPS/D-Gal可诱导肝组织内NF-κB p65亚单位上Lys310位点的乙酰化修饰，这可被garcinol所抑制，但garcinol对LPS/D-Gal诱导的促炎性细胞因子TNF-α和IL-6的表达并无明显影响；（3）TUNEL分析发现garcinol可显著抑制LPS/D-Gal诱导的肝细胞凋亡，这伴随有肝组织内激活型caspase-3水平的降低及caspase-3，-8，-9活性的下调；（4）Garcinol也可明显抑制LPS/D-Gal诱导的肝组织内p53上Lys379位点的乙酰化修饰、下调促凋亡蛋白Bax的表达，但garcinol对抗凋亡蛋白Bcl-2的含量无明显影响。结论：本研究数据显示HATs抑制剂garcinol对LPS/D-Gal诱导的肝损伤具有保护作用，这一保护效应不伴随有肝内炎症因子的表达降低，可能通过抑制p53的乙酰化修饰、降低其活性，从而下调促凋亡蛋白Bax、抑制肝细胞凋亡而实现。结合相关文献及我们的实验资料，我们认为乙酰化在炎症反应中具有多靶点、多样化的复杂调节作用，其对炎症总体结局的影响还存在许多尚未揭示的新规律，有待进一步的深入细致研究。此外，HATs抑制剂在爆发性肝炎中通过抑制凋亡而发挥保肝效应，这对重症肝炎防治有一定启示意义，但这也需要开展进一步的机制探讨和疗效评估。