【摘 要】
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鸡卡氏住白细胞虫病是由卡氏住白细胞虫寄生在鸡体内所引起的血液原虫病,常引起雏鸡大量死亡,育成鸡发育受阻,蛋鸡产蛋率下降,造成巨大经济损失,其对养鸡业的危害不容忽视。卡氏住白细胞虫R7基因编码第二代裂殖体（second-generation schizont,2GS）的外膜蛋白,R7蛋白可诱导机体产生抗2GS抗体,具有良好的抗原性和免疫原性。本研究根据卡氏住白细胞虫R7基因和ps YNO-1表达载体
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鸡卡氏住白细胞虫病是由卡氏住白细胞虫寄生在鸡体内所引起的血液原虫病,常引起雏鸡大量死亡,育成鸡发育受阻,蛋鸡产蛋率下降,造成巨大经济损失,其对养鸡业的危害不容忽视。卡氏住白细胞虫R7基因编码第二代裂殖体（second-generation schizont,2GS）的外膜蛋白,R7蛋白可诱导机体产生抗2GS抗体,具有良好的抗原性和免疫原性。本研究根据卡氏住白细胞虫R7基因和ps YNO-1表达载体构建了重组表达质粒ps YNO-R7。将构建的重组表达质粒ps YNO-R7经原核表达分析显示:重组蛋白R7（recombinant R7 protein,r R7）在37℃、0.1 m M IPTG诱导表达7.5 h时可溶性表达量最高,分子量为90 k Da。经MBP标签纯化后获得r R7蛋白,BCA测定纯化r R7蛋白浓度为1.3 mg/m L。为建立一种鸡卡氏住白细胞虫病简便快速的血清学诊断方法,本研究以纯化r R7为包被抗原建立了鸡卡氏住白细胞虫病间接ELISA检测方法。经反应条件优化后,确定r R7抗原最佳包被浓度为0.65μg/m L,最佳包被条件为37℃孵育2 h;最佳封闭液为5%脱脂奶,最佳封闭条件为在4℃中封闭过夜;血清最佳稀释度为1:500,血清和抗原最佳反应时间为37℃孵育1 h;酶标二抗的最佳工作浓度为1:4000,最佳孵育时间为37℃孵育0.5 h;最佳底物作用时间为15 min;ELISA阴阳性临界值为0.374。用建立的间接ELISA方法对鸡球虫、鸡新城疫病毒、禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒以及鸡痘病毒的标准阳性血清进行检测,结果均为阴性;重复性试验结果显示变异系数小于10%;结果显示建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、重复性和敏感性,可用于鸡卡氏住白细胞虫病的抗体水平检测和流行病学调查。以本研究构建的间接ELISA方法对来自广西、福建、广东和江西部分地区的1615份血清样品进行检测,阳性率为17.28%。其中广西省的阳性率为17.04%,福建省的阳性率为11.88%,广东省的阳性率为19.87%,江西省的阳性率为16.25%。
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