利培酮是新型的抗精神病药物,能较好消除或明显改善精神病患者的精神症状,且不良反应少。在临床治疗中应用日趋广泛,已成为首选的一线治疗药物。大多数临床医生认为,利培酮对精神分裂症及其相关症状,特别是阴性症状,皆有较好的疗效,认为本药具有见效快,用量小,副作用不需处理之优点,为一安全有效的新型抗精神病药,具有广泛的应用前景。但是,随着利培酮应用的日渐广泛,关于其副作用的报道也不断出现,其中,关于利培酮增加脑血管意外风险的报道引起了广泛的关注。这一严重的副作用将直接影响到其临床应用。考虑到非典型抗精神病药较好的疗效以及在临床应用的广泛程度,对这类药物与脑血管意外的关系进行研究,甚至制定个体化治疗方案就显得十分必要。目前,关于利培酮增加脑血管意外风险的大部分报道均为临床调查研究,缺乏直接证据,机制也不明确,故一直存在争论,关于利培酮是否会诱发脑卒中,直到现在也没有定论。鉴于脑卒中的致命致残的严重后果,在本研究中,我们拟通过利用动物模型,明确利培酮对急性缺血性脑卒中是否有加重损害的作用,并做进一步的机制研究。实验一:急性实验,观察利培酮对SHR-SP急性大脑中动脉闭塞手术后梗死面积的影响。30只雄性SHR-SP,20-22周龄,随机分成3组,每组10只,分别给予利培酮0,0.8和2.4 mg/kg一个月。然后进行急性大脑中动脉闭塞手术,各给药组和空白组进行对比,观察梗死面积占半脑面积的百分比是否有显著性变化。结果显示,给予SHR-SP利培酮一个月并作急性大脑中动脉闭塞手术后,相比空白组,给药组的梗死面积占半脑面积的百分比有显著的增加,而且随着剂量的增加,梗死百分比也随之增加。实验二:长期实验,观察终生给予利培酮对SHR-SP生存时间的影响。四月龄SHR-SP,45只,随机分成3组,每组15只,终生分别给予利培酮0,0.8mg/kg/d,2.4mg/kg/d。将药物按动物每日的食料量掺入大鼠标准饲料中,动物自行食用,不施加其它干预措施,长期喂养。动物自由饮水,三组动物的室内温度、相对湿度及光照时间均相同。定时观察,记录动物生存时间。结果显示,终生给予利培酮后,0.8mg/kg/d组大鼠的生存时间没有明显的变化,但是2.4mg/kg/d组的大鼠,生存时间明显的缩短。实验三:急性实验,观察利培酮对SHR和WKY急性大脑中动脉闭塞手术后梗死面积的影响。20只雄性SHR,20-22周龄,随机分成2组,每组10只,分别给予利培酮0和2.4 mg/kg一个月。然后进行急性大脑中动脉闭塞手术,给药组和空白组进行对比,观察梗死面积是否有变化。WKY部分同SHR。结果显示,相比空白组,SHR大鼠的梗死面积有明显的增加,而WKY组则没有明显的变化。实验四:观察一个月给予利培酮后,对大鼠血压和体重的影响。20只雄性SHR-SP,20-22周龄,随机分成2组,分别给予利培酮0和2.4 mg/kg/d一个月,然后观察体重,用尾动脉测压法测量血压。雄性SHR和雄性WKY进行同样的实验操作。结果显示,给予利培酮一个月后,大鼠的血压和体重均没有明显的变化。实验五:利培酮对WKY大鼠炎症指标的影响。培养WKY胎鼠大脑皮层小胶质细胞,分别给予利培酮0, 0.3, 1, 3, 30μM,观察利培酮对正常的小胶质细胞以及内毒素诱导炎症模型后的小胶质细胞的影响。结果表明,不管是对正常的小胶质细胞,还是对内毒素诱导炎症模型后的小胶质细胞,利培酮均没有促进炎症的作用。实验六:利培酮对WKY和SHR-SP大鼠氧化应激指标的影响。雄性WKY大鼠,20-22周龄,6只,随机分为2组,每组3只,分别给予利培酮0和2.4 mg/kg/d一个月,然后做急性大脑中动脉闭塞手术,24小时后处死取脑,切割出同侧且包含梗死部位的体积大致相等的脑组织,测量SOD和GSH-Px的活力以及MDA的含量。结果表明,利培酮对WKY和SHR-SP大鼠氧化应激各指标的活力均没有显著的影响。实验七:利培酮对大鼠大脑皮层神经元细胞凋亡的影响培养大鼠大脑皮层神经元,观察利培酮对SHR-SP和WKY大脑皮层神经元的毒性,剂量分别为0, 30, 60, 90, 120, 150μM(n=6)。先用MTT法测量,然后根据实验结果,再用流式细胞术加以验证和确认,剂量分别为0, 30, 60, 90μM(n=6)。由此确认不能产生细胞毒性的剂量为0, 30, 60, 90μM。分别制作双氧水诱导凋亡模型和氧气-葡萄糖剥夺凋亡模型,观察利培酮对大脑皮层神经元凋亡模型的影响。先用MTT法测量利培酮对WKY和SHR-SP两种模型凋亡神经元的影响(n=6),再用流式细胞术和TUNEL检测利培酮对双氧水造模WKY,SHR和SHR-SP三种凋亡神经元的影响,以确定利培酮对神经元产生影响是否与血压因素有关。结果显示,在剂量0, 30, 60, 90μM时,利培酮不能产生细胞毒性。在这三个剂量下,不管是MTT法,流式细胞术还是TUNEL,都可检测到利培酮能够明显的促进SHR-SP和SHR的细胞凋亡,而对WKY没有影响或者影响很小。实验八利培酮对大脑超显微结构的影响雄性SHR-SP,6只,20-22周龄,随机分成2组,每组3只,分别给予利培酮0和2.4 mg/kg/d一个月。同样,雄性WKY,数目、分组和给药与SHR-SP相同。一个月后,用日立H-7000电子透射显微镜观察两组脑部超显微结构的不同之处,以观察利培酮对两种大鼠大脑超显微结构的影响。另外,取雄性WKY和SHR-SP,数目、分组和给药均与上述相同。一个月后,施行急性大脑中动脉闭塞手术,同样用电镜观察脑部超显微结构,以观察利培酮是否会加重脑梗死的损害。结果显示,喂养利培酮一个月后,SHR-SP和WKY的微血管内皮细胞空泡化,线粒体损伤,染色质聚积,溶酶体增加。再施行急性大脑中动脉闭塞手术,空白组本身有一定损害,但给药组的脑部损害比空白组更加严重。结论:1.利培酮能够增加脑卒中风险性。2.利培酮的这一不良作用建立在高血压基础上。3.利培酮能够增加Bax的表达,进而通过线粒体途径,导致细胞凋亡,最终增加高血压大鼠的脑卒中易感性。4.利培酮还能损伤大脑微血管内皮细胞,影响血管通透性和管壁弹性。