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背景:目前脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的预防、治疗和康复是目前临床工作种难以攻克的难题。而生物细胞学技术和组织工程技术的发展为治疗脊髓损伤带来新的治疗方案。目的:研究乳鼠脑组织源神经干细胞(neural stem cells,NSCs),联合聚乳酸-乙醇酸工程支架(Poly-Lactic-co-glycolicacid,PLGA)移植治疗SD大鼠脊髓半横断损伤的效果。方法:(1)乳鼠NSCs的分离和培养的优化:取出生3天的SD乳鼠大脑颞叶皮质,分别用机械吹打法、胰蛋白酶消化法分离培养,通过免疫荧光法对NSCs进行鉴定和诱导分化;分别于培养的第2、5、7天计数细胞球直径及数目;通过MTT法比较原代及传代后第3亚代NSCs克隆增值速率。(2)NSC与PLGA复合体移植治疗SD大鼠脊髓半横断损伤修复作用:将72只雌性SD大鼠分成6组:正常组、假手术组、手术组、NSCs移植组、PLGA移植组、NSCs+PLGA复合体共移植组。制作脊髓半横断模型,正常组不做处理,假手术组仅摘除椎板;其他各组行脊髓右侧半横断术;术后第7天,再次打开脊髓,手术组于损伤处移入20ul培养液,NSCs移植组移入含NSCs培养液;PLGA移植组将PLGA组织工程支架植入脊髓损伤处;NSCs+PLGA复合体共移植组将NSCs+PLGA复合体植入脊髓损伤处。每组大鼠于术前1d、术后7d、移植后第1、2、4、8周行BBB评分、IP评分等行为学,于移植后第2、4、8周,行电生理MEPs检查、病理HE染色。结果:(1)NSCs的分离和培养的优化:机械吹打组与胰酶消化组获得的NSCs,行免疫荧光发现,Nestin、NF-200、GFAP染色均阳性,培养第5、7天时,机械吹打组获得的细胞球数量和直径均高于相同培养时间点的胰酶消化组,差异有统计学意义(p<0.05)。机械吹打组原代和第3亚代细胞第2、5天细胞克隆增殖能力均优于同时间节点的胰酶消化组,差异有统计学意义(p<0.05)。(2)行为学评价:移植后第4、8周时NSCs移植组、PLGA移植组、NSCs+PLGA复合体移植组BBB评分、IP评分高于手术组,差异有统计学意义(p<0.05);NSCs移植组、PLGA移植两组比较,差异无统计学意义(p>0.05)。移植后第4、8周,NSCs+PLGA复合体移植组BBB评分、IP评分高于NSCs移植组、PLGA移植组,差异具有统计学意义(p<0.05)。(3)电生理:运动诱发电位(MEPs)潜伏期比较显示:移植后第2、4、8周,NSCs移植组、PLGA移植组、NSCs+PLGA复合体移植组优于手术组(p<0.05);移植后第2、4、8周NSCs+PLGA复合体移植组优于NSCs移植组、PLGA移植组(p<0.05)。同时间点各组健侧MEPs的潜伏期轻度优于手术侧,但是在统计学上差异无意义(p>0.05)。(4)病理HE染色:各实验组脊髓组织行HE染色后,发现移植后第8周时,NSCs移植组、PLGA移植组、NSCs+PLGA移植组损伤处脊髓组织结构较前有所恢复,空洞、瘢痕组织少于手术组。NSCs+PLGA复合体移植组周围组织结构恢复更好,空洞、瘢痕组织少于NSCs移植组、PLGA移植组。结论:1.机械吹打法、胰酶消化法均可成功分离培养、诱导分化NSCs,但是机械吹打法分离培养的NSCs的克隆增殖能力优于胰酶消化法。2.通过行为学、电生理及病理学评估发现NSCs+PLGA复合体移植对SD大鼠脊髓半横断损伤有一定的修复作用,尤其对后肢运动能力的恢复比较明显。但是对脊髓损伤的解剖结构的重塑和功能的恢复作用有限。3.NSCs、PLGA单独移植时行为学、电生理、病理学评价较手术组有一定的改善,但改善程度弱于两者复合体移植治疗。