浙江安吉野生蝉花及其生境土壤微生物菌群分析及多样性研究

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蝉花是一种历史悠久,并且药用价值很高的药食用真菌。近年来,蝉花的膳食和药用方面的巨大应用潜力被不断地发掘,但随之也引发了人们的疯狂采摘,加上生态环境的不断恶化,导致蝉花的天然资源日益紧张,蝉花的人工培育成为国内外研究的热点。由此,对影响蝉花子实体生产的重要环境因素的探索是非常有必要的。在本研究中,为了揭示蝉花子实体复杂的生长机制,并探索微生物群落之间可能的相互作用,我们利用高通量测序手段探索了野生蝉花的内外部微生物群落结构,并分析了对蝉花子实体产生重要影响的周围土壤的理化性质。此外,为了后续人工蝉花的培育,我们分离了导致子实体形成的关键优势真菌菌株,并分别对其进行液体发酵以及固体发酵培养,从而得到与野生蝉花成分接近的人工培养物。本实验选取浙江省安吉县蝉花的菌核、孢梗束以及生境土壤分别进行了高通量测序以揭示其微生物群落结构以及比较各样品菌群群落组成差异。结果显示蝉花生境土壤中菌群的多样性和丰富度要显著高于孢梗束和菌核。在土壤、孢梗束、菌核中共检测到200个细菌OTU,其中土壤中检测到细菌11门17纲43目57科78属,孢梗束中有7门9纲27目38科59属,菌核中有7门8纲25目36科57属。共检测到真菌OTU 346个,土壤中检测到真菌8门24纲44目72科85属,孢梗束中6门11纲22目36科45属,菌核中4门8纲12目17科17属。其中土壤中的优势细菌菌属分别为Burkholderia-Caballeronia-Paraburkholderia、Bacillus(芽孢杆菌属)、Acidibacter、f__Xanthobacteraceae_Unclassified、Candidatus_Solibacter;优势真菌菌属分别为Isaria(棒束孢属)、f__Clavariaceae_Unclassified(珊瑚菌科的未知属)、Umbelopsis(伞状霉属)、f__Chaetomiaceae_Unclassified(毛壳科的未知属)、Mortierella(被孢霉属)。孢梗束中优势细菌菌属分别为Pedobacter(土地杆菌属)、f__Enterobacteriaceae_Unclassified(肠杆菌科的未知属)、Pandoraea(潘多拉菌属)、Allorhizobium-Neorhizobium-Pararhizobium-Rhizobium、Phyllobacterium(叶杆菌属)、Chitinophaga、Stenotrophomonas(寡养单胞菌属)、Burkholderia-Caballeronia-Paraburkholderia、Allorhizobium-Neorhizobium-Pararhizobium-Rhizobium、Serratia、Pedobacter、Comamonas、Pandoraea、f__Mitochondria_Unclassified、Chitinophaga;优势真菌菌属分别为Isaria(棒束孢属)、Apiospora(梨孢假壳属)、Cladosporium(枝孢霉属)。菌核中优势细菌菌属分别为Achromobacter(无色杆菌属)、f__Enterobacteriaceae_Unclassified、Stenotrophomonas、Burkholderia-Caballeronia-Paraburkholderia、Allorhizobium-Neorhizobium-Pararhizobium-Rhizobium、Serratia(沙雷氏菌属)、Pedobacter、Comamonas(丛毛单胞菌属)、Pandoraea、Chitinophaga;优势真菌菌属为Isaria。对蝉花周边土壤的理化性质测定结果表明,相比于对照组,蝉花生境土壤中含水量(MC)、全氮(TN)和有机质(OM)含量明显较高。此外,土壤理化特征与其中的微生物群落结构密切相关,Pearson相关性分析的结果显示MC、Fe、Zn与土壤中的优势菌属Isaria呈显著负相关,Cu与大多数土壤中的优势细菌菌属呈显著负相关,而Mg与大多数优势类群呈显著正相关。从野生蝉花中进行分离纯化得到的优势真菌菌株AH10-4,经鉴定确定其为Cordyceps cicadae菌株,对AH10-4及其他两株购买的C.cicadae菌株分别进行液体发酵培养后,发现AH10-4菌株发酵菌丝在生物量、腺苷、N~6-(2-羟乙基)-腺苷(HEA)的含量上呈现出明显优势,因此选择该菌株作为后续实验的出发菌株,继续进行固体发酵,得到的子实体中的腺苷的含量为1.979±0.115 mg/g,HEA含量为5.815±0.392mg/g。相比于天然蝉花,人工培养产物中的腺苷与HEA含量明显较高。本研究为蝉花的侵染机制的研究奠定了基础,为进一步了解蝉花的形成机制提供了新的见解,为人工蝉花的规模化栽培提供了新思路。
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