食管癌差异表达蛋白的分离鉴定及功能研究

来源 :北京协和医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lyre1981
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近二三十年来,肿瘤的诊断和治疗水平有了较大改进,但肿瘤的死亡率并无明显改善,复发和转移仍然是肿瘤患者死亡的重要原因,肿瘤细胞的运动能力与其高迁移和侵袭特征密切相关。食管癌是我国第四位常见恶性肿瘤,其主要组织学类型为食管鳞状细胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma, ESCC),严重危害着人民健康。本研究采用二维电泳(Two dimensional electrophoresis,2DE)-分离-基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定的常规蛋白质组分析技术,分析了8对伴随淋巴结转移和无淋巴结转移ESCC组织的差异蛋白质组表达谱。从癌与癌旁远端切缘食管上皮中共鉴定了36个非冗余的差异蛋白。其中,23个在肿瘤组织中表达升高、13个表达降低。差异蛋白功能通路分析提示,伴随淋巴结转移的食管癌组织中糖酵解代谢通路明显富集。进一步功能验证实验发现,与对照细胞相比食管癌细胞葡萄糖消耗和乳酸生成量均明显升高,食管癌细胞线粒体发生不同程度的紊乱。对比糖酵解活性较强的食管癌细胞KYSE 410和活性较弱的KYSE 30细胞,KYSE 410细胞的代谢对糖酵解通路依赖性更强、细胞迁移能力更强。对两个鉴定的食管癌差异蛋白,即微管调节蛋白Stathmin和不均一核糖核蛋白H(Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H, hnRNP H)进一步在较大临床组织样本上进行了验证。Western blot和免疫组织化学分析显示,差异蛋白stathmin和hnRNP H在食管癌中表达明显升高。敲降stathmin可降低食管癌细胞KYSE30和KYSE410的体外迁移能力;紫杉醇诱导stathmin磷酸化后,食管癌细胞迁移能力降低。结果提示,食管癌细胞有氧糖酵解(Warburg效应)程度与其运动能力呈正相关,stathmin和hnRNP H有可能成为鉴别食管癌运动能力的潜在分子标志和干预靶点。
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