目的：
　　研究慢病毒介导shRNA干扰KDM5C对食管癌EC109细胞增殖、迁移和细胞周期的影响，采用基因芯片技术分析干扰KDM5C后EC109细胞基因表达谱的变化，探索KDM5C调控食管癌EC109细胞生长增殖的相关机制。
　　方法：
　　1.构建shRNA干扰KDM5C的慢病毒载体(Lv-shKDM5C)及空病毒载体(Lv-NC)，分别稳转人食管鳞状细胞癌EC109细胞，qRT-PCR验证稳转慢病毒载体后KDM5C在EC109细胞中的表达水平。
　　2.CCK8(Cell-counting kit 8)技术检测稳转Lv-shKDM5C后EC109细胞的增殖能力。
　　3.划痕实验检测稳转Lv-shKDM5C后EC109细胞的迁移情况。
　　4.流式细胞仪(FCM)检测稳转Lv-shKDM5C后EC109细胞周期变化。
　　5.采用基因芯片技术(Affymetrix PrimeViewTM Human Gene Expression Array)，从稳转Lv-shKDM5C的EC109细胞及对照组细胞(Lv-NC)中筛选差异表达的基因(DEGs)。
　　6.通过生物信息学技术对差异表达的基因进行GO功能注释及KEGG通路富集分析，采用String软件结合文献查阅选择与肿瘤发生发展密切相关的基因。
　　7.实时荧光定量(Quantitative Real-time PCR，qRT-PCR)及Westernblotting验证基因芯片关键的DEGs。
　　结果：
　　1.使用慢病毒载体Lv-shKDM5C和空病毒载体，稳转人食管鳞癌EC109细胞，qRT-PCR
　　结果显示与对照组相比(Lv-NC)，感染Lv-shKDM5C慢病毒载体的EC109细胞KDM5CmRNA表达量下降(p<0.01)，提示成功构建干扰KDM5C的稳转细胞株。
　　2.CCK8实验表明干扰KDM5C后48h、72h和96h，EC109细胞生长增加(p<0.01)。
　　3.划痕实验表明干扰KDM5C后24h和48h，EC109细胞迁移能力增强(p<0.05)。
　　4.流式细胞仪结果表明，干扰KDM5C后EC109细胞的细胞周期G1期比例降低，S期比例升高(p<0.05)，提示干扰KDM5C可促进细胞周期从G1期向S期转化，促进DNA合成。
　　5.生物信息学方法分析干扰KMD5C后基因芯片结果，以“Foldchange>2or<0.5，p<0.05”作为筛选条件，获得差异表达基因220个，其中上调基因171个，下调基因49个。GO功能注释表明差异基因主要涉及丝氨酸家族氨基酸代谢、tRNA氨酰化、C3HC4型RING指结构域结合、蛋白质折叠伴侣、核小体、蛋白质-DNA复合物等过程。KEGG通路富集分析显示5条信号通路具有明显统计学意义，分别为：维生素B6代谢，氨酰基-tRNA的生物合成，甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢，丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢，氨基酸的生物合成等通路。根据PPI结果，PHGHD和PSAT1被挑选为关键的DEGs。
　　6.qRT-PCR及Westernblotting结果表明干扰KDM5C后PHGHD、PSAT1的mRNA及蛋白表达均增加，与基因芯片结果相一致。
　　结论：
　　1.成功制备干扰KDM5C的慢病毒载体，将其感染食管癌EC109细胞后可使KDM5C表达明显下降，获得稳转的shRNA干扰KDM5C的细胞系。
　　2.干扰KDM5C后促使细胞周期从G1期向S期转化，并促进EC109细胞增殖和迁移。
　　3.根据基因芯片结果，筛选出DEGs基因共220个。根据DEGs构建了蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络，分析了共表达模块，确定关键基因为PHGDH和PSAT1。
　　4.干扰KDM5C后通过上调PHGDH、PSAT1的表达促进EC109细胞的生长。