论文部分内容阅读
研究表明家蚕血淋巴可以抑制病毒引起的昆虫细胞、哺乳动物细胞的凋亡，其主要包含70K和30K蛋白家族。家蚕30K蛋白是一类分子量在30kD左右，被称为“贮藏蛋白”的特殊脂蛋白，目前共发现有五种。然而30K蛋白的功能尚未完全阐明。
根据家蚕30K蛋白序列设计特异引物(引入BamHI及EcoRI酶切位点)，采用RT-PCR方法扩增30KCl9基因，将BamHI和EcoRI酶切后的30KCl9基因片段连接到用相同酶切的pUCl8载体上，进行测序分析。结果表明该基因读码框大小为771bp，编码256个氨基酸。
将30KCl9基因克隆到杆状病毒转座载体pFastBacHTB中，构建了pFastBacHTb-30KCl9重组载体，并转化至受体茵DH10Bac，重组获得重组杆状病毒Ac/Bacmid-30KCl9及Bm/Bacmid-30KCl9的DNA。以此DNA分别转染粉纹夜蛾(Trichoplusia ni,TN5)和家蚕(Bombyx mori，Bm-N)细胞，获得了重组病毒Ac/r-30KCl9及Bm/r-30KCl9。重组病毒在TN及Bm-N细胞中的表达产物经SDS-PAGE和Western-Blot检测，得到一条分子量约为33kD的特异表达条带，与表达产物的理论值相符；同时，以AcNPV及BmNPV为对照，分别以重组病毒感染TN5细胞及家蚕幼虫，观察其感染后不同时间的凋亡及死亡率。结果表明重组杆状病毒Ac/Bacmid-30KCl9感染的TN5细胞相对于野生病毒其存活时间明显增加，以重组杆状病毒Bm/Bacmid-30KCl9感染的家蚕幼虫，其死亡率较低，存活时间延长。结果初步表明，过量表达30K蛋白有助于抗凋亡和延长存活时间等作用。为了进一步研究30K蛋白的抗凋亡机制奠定了基础。