第一部分：脂肪因子chemerin与充血性心胃衰竭的相关性研究　　目的:晚近发现的脂肪细胞因子chemerin在胰岛素抵抗和免疫炎症反应中发挥重要作用。充血性心力衰竭(CHF)与后两者密切相关。由此本部分检测CHF患者体循环中chemerin水平的变化，并探讨其与心衰相关临床生化指标之间的关系。　　方法:临床入选52位充血性心力衰竭患者(CHF组)，52位心功能正常的心血管疾病患者(NHF组)，两组平均年龄70.9±1.6岁，男性比例73％和26例健康人群为正常对照组(NCD组)，平均年龄67.9±2.4岁，男性比例65%，使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测chemerin及TNF-α的外周血浓度，同时检测相关的临床生化指标。统计chemerin与各生化指标之间的相关性。　　结果:①CHF组患者血浆chemerin水平(220.0±9.7ng/ml)较NHF组患者(165.6±8.0ng/ml，P<0.001)及正常对照组(147.2±11.3ng/ml，P<0.001)明显升高；②CHF组，心力衰竭严重程度按纽约心脏协会(NYHA)分级后分组，心功能 IV级患者的血浆chemerin水平(n=9，294.8±69.0ng/ml)较心功能III级(n=17，221.6±58.7ng/ml，P<0.01)和II级患者(n=26，193.0±63.0ng/ml，P<0.01)更高；③ Spearman相关分析显示血浆chemerin水平与体质指数(r=0.340，P=0.013)、左室射血分数(r=-0.337，P=0.014)、甘油三酯(r=0.279，P=0.046)、HOMA-IR(r=0.389，P=0.004)、TNF-α(r=0.379，P=0.006)、NT-proBNP(r=0.336，P=0.008)、同型半胱氨酸(r=0.285，P=0.041)相关；④多元逐步回归分析显示在CHF组和NHF组，血浆chemerin水平都与代表胰岛素抵抗的指标HOMA-IR(β=0.340，P=0.006)和肥胖相关指标体重指数BMI(β=0.323，P=0.008)显著正相关；经过年龄和性别校正后，TNF-α(β=0.376，P=0.002)仅在CHF组与血浆chemerin正相关。　　第二部分：脂肪因子Chemerin在心室重构心脏成纤维细胞增殖中作用的初步研究　　目的:心脏成纤维细胞(CFb)作为CHF心室重构中的主要参与者，其增殖是心室重构心肌纤维化的重要原因。本部分在本课题临床部分CHF患者血浆中chemerin水平显著升高结果基础上，通过构建体外心肌纤维化模型，并检测CFb增殖过程中chemerin表达变化，以及沉默chemerin基因表达后，对CFb增殖的影响，初步探讨chemerin在心室重构CFb增殖中的作用，明确chemerin在心力衰竭中的可能病理生理作用。　　方法:1. Chemerin在心脏组织mRNA及蛋白水平表达的检测:使用聚合酶联反应(PCR)检测心脏组织及心肌细胞及心脏成纤维细胞chemerin mRNA的表达情况；免疫组织化学染色法检测SD大鼠心脏组织chemerin蛋白的表达；并进一步通过细胞免疫荧光法明确chemerin蛋白在心肌细胞及心脏成纤维细胞的表达定位；2.血管紧张素II(AngII)刺激CFb增殖过程中chemerin表达水平变化的检测:采用原代细胞培养技术，培养SD大鼠乳鼠的CFb，以AngⅡ1×10-7mol/L诱导CFb增殖建立心肌纤维化细胞模型，分4个时间梯度(0h、6h、12h、24h)进行，采用实时荧光定量PCR(QT-PCR)检测CFb增殖过程中设置的时间点chemerin mRNA的表达情况；同时用AngⅡ受体AT1阻滞剂缬沙坦阻断AngⅡ诱导的CFb增殖，采用QT-PCR检测chemerin mRNA的表达水平。3. Chemerin在AngII刺激CFb增殖过程中作用的研究:设计及合成chemerin基因的小分子干扰RNA(siRNA)，通过脂质体LipofectamineTM2000转染到CFb内沉默chemerin基因表达，通过CCK-8实验观察chemerin基因沉默对AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞增殖的影响。　　结果:1. chemerin在SD大鼠乳鼠的心脏组织RNA及蛋白水平有表达，细胞免疫荧光显示主要 chemerin主要存在于心脏成纤维细胞胞浆中，而新生鼠心肌细胞中表达量较低。2.AngII刺激CFb后6小时，chemerin表达量下降至最低，此后chemerin在12小时和24小时后表达量逐渐恢复；使用AT1受体阻滞剂缬沙坦可明显抑制AngII刺激导致chemerin表达下调的作用。3.瞬时转染siRNA至CFb，QT-PCR及免疫印迹方法筛选出最有效的沉默片段，沉默效率达X%，使用此片段在CCK-8实验中沉默CFb中chemerin表达。　　结论:脂肪因子chemerin主要在心脏成纤维细胞中表达，在AngⅡ刺激CFb增殖的心肌纤维化细胞模型中表达显著下调，从而起到保护/损害心肌作用，提示chemerin可能通过内分泌、自分泌及旁分泌方式在心力衰竭心室重构过程中发挥重要作用。